[发明专利]用于敲除链霉菌基因的载体及其构建方法与应用

权利要求书

1.构建重组载体的方法，是将葡聚糖酶基因插入pKC1139的ClaⅠ位点，得到的重组DNA即为所述重组载体。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述葡聚糖酶基因编码如下a）或b）的蛋白质：

a）氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的蛋白质；

b）将SEQ ID No.1中的一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有降解纤维素活性的由a）衍生的蛋白质。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述葡聚糖酶基因的编码序列如SEQID No.2的第208-1707位。

4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述葡聚糖酶基因的核苷酸序列是SEQID No.2的第9-1707位。

5.由权利要求1-4中任一所述方法构建的重组载体。

6.含有权利要求5所述重组载体的重组微生物。

7.权利要求5所述的重组载体在敲除不产葡聚糖酶的链霉菌基因中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述不产葡聚糖酶的链霉菌为利迪链霉菌、恰塔努加链霉菌、纳塔尔链霉菌或褐黄孢链霉菌。

9.链霉菌目的基因敲除载体，是在权利要求5所述的重组载体的多克隆位点插入用于敲除链霉菌目的基因的DNA片段得到的重组DNA。

10.一种制备目的基因被敲除的链霉菌突变株的方法，包括如下步骤：将权利要求9所述的链霉菌目的基因敲除载体导入待敲除所述目的基因的链霉菌中，通过硫链丝菌素抗性筛选得到硫链丝菌素抗性的转化子，从所述硫链丝菌素抗性的转化子中筛选不降解纤维素的转化子，得到的不降解纤维素的转化子即为候选的目的基因被敲除的链霉菌突变株；所述待敲除所述目的基因的链霉菌为不产葡聚糖酶的链霉菌。