[发明专利]一种硫酸盐还原菌的检测方法

权利要求书

1.一种检测硫酸盐还原菌用的特异性引物对，其序列为：

正向：GCGTAGATATCAGGAGGAACAC；

反向：CACCTAGCACCCATCGTTTAT。

2.一种检测硫酸盐还原菌的方法，包括如下步骤：

（1）提取待测样品中微生物的DNA；

（2）采用权利要求1所述特异性引物对，对Desulfotomaculum thermocisternum标准样品DNA和步骤（1）获得的待测样品DNA进行荧光定量PCR扩增；

（3）读取荧光定量PCR扩增反应初始循环数，获得环境样品中Desulfotomaculum thermocisternum的定量结果。

3.如权利要求2所述的检测硫酸盐还原菌的方法，其特征在于，其中所述Desulfotomaculum thermocisternum标准样品DNA的系列溶液按以下方式制备：取纯培养Desulfotomaculum thermocisternum样品，测定细菌浓度后按10倍梯度稀释，分别提取不同稀释样品的DNA。

4.如权利要求2所述的检测硫酸盐还原菌的方法，其中所述Desulfotomaculum thermocisternum标准样品DNA在针对不同待测样品检测时可重复使用。

5.如权利要求2所述的检测硫酸盐还原菌的方法，其中所述荧光定量PCR扩增的反应体系组成如下：9.5μL无菌水、12.5μL Universal SYBR Green Master Mix、12.5μM的正向和反向引物各0.5μL、2μL标准样品DNA或待测样品DNA。

6.如权利要求2所述的检测硫酸盐还原菌的方法，其中所述荧光定量PCR扩增的程序设置为：a)95°C保温3min；b)94°C保温20s；c)60°C保温30s；d)重复执行b）~c）39次；e)从65℃开始每5s增加0.5℃至达到95℃为止；f)读取荧光定量PCR扩增反应初始循环数。