[发明专利]一种促进带叶兜兰种子共生萌发的真菌及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种促进带叶兜兰种子共生萌发的真菌及其应用。

背景技术

兜兰属（Paphiopedilum）植物，花形奇特，花色艳丽，是人们最喜爱的兰科植物之一，人们常称兜兰为“拖鞋兰”、“仙履兰”。近十几年来，由于猖獗走私以及生境破坏等原因，野生兜兰的数量急剧减少，分布区逐渐萎缩，不少种类已经到了灭绝的边缘。

为了缓解对野生植株的采集压力，保护濒危物种，以及满足人们对兜兰属植物的需求，国内外学者对兜兰植物的人工繁殖进行了大量地研究。目前，部分兜兰种类的无菌播种和组织培养技术已获成功，但无菌苗栽培后生长缓慢，成活率低，制约着兜兰的人工繁育。在自然条件下，兰科植物种子需要有合适的菌根真菌侵染，为其提供营养才能正常萌发，并帮助植物度过脆弱的幼苗期长成植株。国内外学者利用兰科菌根真菌与其种子进行共生萌发的技术已用于多种兰科植物，但因为兜兰属植物菌根真菌分离培养困难，尚缺乏可以与兜兰种子共生萌发的菌株。

发明内容

本发明的目的是提供一种促进带叶兜兰种子共生萌发的真菌及其应用。

本发明提供的菌株PhI17，经形态学和分子生物学鉴定为担子菌亚门胶膜菌科的瘤菌根菌属（Epulorhiza sp.），已于2012年11月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101），保藏号为CGMCC No.6756。

所述菌株PhI17可用于促进带叶兜兰种子萌发。

本发明还保护一种促进带叶兜兰种子萌发的方法，包括如下步骤：将所述菌株PhI17和带叶兜兰种子共培养。所述共培养具体可在燕麦培养基上进行。所述共培养的条件具体可为：23℃黑暗培养。

所述菌株PhI17可用于促进带叶兜兰幼苗生长。

本发明还保护一种带叶兜兰育苗方法，包括如下步骤：将所述菌株PhI17和带叶兜兰种子共培养，直至种子萌发并长出真根。所述共培养具体可在燕麦培养基上进行。所述共培养的条件具体可为：23℃黑暗培养。

所述育苗方法还可包括将长出真根的幼苗移栽至燕麦培养基进行23℃光照培养的步骤。

所述育苗方法还可包括如下步骤：进行所述光照培养直至幼苗叶片长度大于3cm，然后将所述幼苗移栽至混合基质中，25℃培养（每天12小时光照，12小时黑暗）。

所述燕麦培养基的具体制备方法如下：将8g燕麦片加入蒸馏水中，煮沸30分钟，纱布过滤后收集滤液，用蒸馏水定容至1000ml，再加入10g琼脂和0.05g氯霉素。

将所述菌株PhI17与带叶兜兰种子共培养可以成功促进带叶兜兰种子萌发，并进一步促进幼苗发育，长出能进行光合作用的叶片，将幼苗移栽至基质培育，幼苗均能存活且生长良好。采用本发明提供的方法促进带叶兜兰种子萌发或进行带叶兜兰育苗，操作简单、成本低廉。本发明对于带叶兜兰的人工繁育有重要的经济价值。

附图说明

图1为菌株PhI17的形态。

图2为菌株PhI17和带叶兜兰种子共生培养75天的照片。

图3为将长出真根的原球茎移至装有燕麦培养基的三角瓶，23℃培养过程中幼苗的照片。

图4为将幼苗移栽至混合基质，25℃培养过程中幼苗的照片。

具体实施方式

以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。

带叶兜兰（P.hirsutissimum）：参考文献：刘仲健,陈心启,陈利君等,中国兜兰属植物.2009,北京：科学出版社.pp93-100。

燕麦培养基的制备方法：将8g燕麦片加入蒸馏水中，煮沸30分钟，用纱布过滤并收集滤液，用蒸馏水定容至1000ml，再加入10g琼脂和0.05g氯霉素，加热搅拌至琼脂溶解，分装后121℃湿热灭菌20分钟。

混合基质的制备方法：将等体积的沙子和蛭石混合，表面覆盖一层苔藓。

实施例1、菌株的获得、鉴定与保藏

一、菌株PhI17的获得