[发明专利]胶原/纳米纤维素皮肤再生材料及其制备方法与应用有效
申请号: | 201310020814.7 | 申请日: | 2013-01-18 |
公开(公告)号: | CN103083723A | 公开(公告)日: | 2013-05-08 |
发明(设计)人: | 郭瑞;张渊明;李卫昌 | 申请(专利权)人: | 暨南大学 |
主分类号: | A61L27/26 | 分类号: | A61L27/26;A61L27/54;A61L27/60 |
代理公司: | 广州市华学知识产权代理有限公司 44245 | 代理人: | 裘晖;陈燕娴 |
地址: | 510632 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 胶原 纳米 纤维素 皮肤 再生 材料 及其 制备 方法 应用 | ||
技术领域
本发明属于皮肤再生材料制备技术领域,特别涉及一种胶原/纳米纤维素皮肤再生材料及其制备方法与应用。
背景技术
皮肤是人体最大的器官,是机体与外界的天然屏障。皮肤的组成与结构具有高度的复杂性,包括多种细胞、弹性纤维、胶原纤维、蛋白多糖等生物大分子以及葡萄糖、氨基酸、无机盐和维生素等小分子。人体的皮肤由表皮、基底膜、真皮以及皮下组织四个部分构成的。临床上,外伤、溃疡、发炎、烧伤、手术及先天性畸形等皮肤缺损与异常,不仅造成患者身体的痛苦,同时也常造成心灵创伤。皮肤组织工程便是这一新兴学科中发展最早、最快的领域之一。人工皮肤作为一种皮肤创伤修复材料和损伤皮肤的替代品,在自体皮有限的情况下,可以使皮肤大面积受损和深度烧伤者,进行修复治疗并使之恢复相关的生理功能。
皮肤再生材料血管化速度是影响其再生性能、决定材料移植成活率的关键。因此,如何促进皮肤再生材料的血管化速度,进而缩短创面缺血时间,提高移植存活率,是皮肤再生与修复研究中的关键问题。
发明内容
本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足,提供一种胶原/纳米纤维素皮肤再生材料的制备方法。
本发明的另一目的在于提供有上述制备方法得到的胶原/纳米纤维素皮肤再生材料。
本发明的再一目的在于提供所述的胶原/纳米纤维素皮肤再生材料的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现:一种胶原/纳米纤维素皮肤再生材料的制备方法,包括如下步骤:
(1)将山梨糖醇酐油酸酯(斯盘-80,Span80)加入植物油中,于40~60℃边机械搅拌边加入明胶溶液,机械搅拌2~3h后,边冰浴搅拌边加入戊二醛,冰浴搅拌2~3h后加入丙酮A,静置,过滤,得到微球;将微球置于丙酮B中,室温固化12~24h后转移到氨基乙酸中,离心,取微球沉淀,分别用丙酮C和异丙酮交替洗涤3~6次后浸泡于去离子水中,-20~-60℃冷冻干燥,得到明胶微球;将明胶微球加入生长因子溶液中,混合均匀,得到负载生长因子的明胶微球溶液;每毫升植物油中含有1.00~6.25mg山梨糖醇酐油酸酯,每毫克明胶微球加入10~100μl生长因子溶液;植物油、明胶溶液、戊二醛、丙酮A、丙酮B、氨基乙酸与去离子水的体积比为100~200:5~30:0.5~1:20~50:50~100:50~100:100~200;
(2)将0.1~1.0wt%的纳米微晶纤维素溶液(CNC溶液)加入0.5~1.0wt%的胶原溶液中,纳米微晶纤维素与胶原的质量百分比为1~10%,机械搅拌2~3h,真空脱泡,得到胶原/纳米微晶纤维素混合溶液;将胶原/纳米微晶纤维素混合溶液注入模具中,于-5~-60℃冷冻干燥,得到胶原/纳米微晶纤维素三维多孔支架;将胶原/纳米微晶纤维素三维多孔支架浸泡于0.25~1.00wt%的戊二醛水溶液中,4~25℃反应6~24h后用去离子水清洗3~6次,于-5~-60℃冷冻干燥,得到胶原/纳米微晶纤维素支架;
(3)将步骤(1)的负载生长因子的明胶微球按质量比0.5:100~5:100加到步骤(2)的胶原/纳米微晶纤维素支架上,室温放置2~5h,自然干燥,得到胶原/纳米纤维素皮肤再生材料;
步骤(1)中:
所述的搅拌的速度优选为500~1000r/min;
所述的明胶溶液优选为5~10wt%的明胶水溶液;
所述的戊二醛优选为15~25wt%的戊二醛水溶液;
所述的离心的条件优选为2000r/min离心10分钟;
所述的生长因子溶液为20~50μg/mL生长因子水溶液,优选为50μg/mL生长因子水溶液;
每毫克明胶微球优选加入100μl生长因子溶液;
所述的生长因子优选为表达血管内皮细胞生长因子(VEGF)、酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)或碱性成纤维细胞生长因子(bFGF);
步骤(2)中:
所述的0.5~1wt%的胶原溶液优选采用以下方法进行配制:将胶原加入0.5~1wt%的乙酸溶液中,搅拌均匀,配制成0.5~1wt%的胶原溶液;
所述的0.1~1wt%的纳米微晶纤维素(cellulose nanocrystals,CNC)溶液优选采用以下方法进行配制:将纳米微晶纤维素加入0.5~1wt%的乙酸溶液中,搅拌均匀,配制成0.1~1wt%的纳米微晶纤维素溶液;
所述的0.5~1wt%的乙酸溶液优选为0.5~1wt%的乙酸水溶液;
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