[发明专利]一种检测磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的试纸条及方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的试纸条及方法，具体涉及一种用于同时检测牛奶中磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的胶体金试纸条。

技术背景

磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是一类具有对氨基苯磺酰胺结构的化学治疗药物，通过影响细胞核蛋白质的合成，抑制细菌的繁殖。氟喹诺酮类药物（Fluoroquinolones，FQs）是人工合成的含4-喹诺酮基本结构的抗菌药，它通过抑制细菌DNA的合成而达到抑菌作用。由于FQs和SAs能抑制大多数革兰氏阳性菌和阴性菌，性质稳定、价格低廉、使用方便，常以亚治疗浓度的药物作为饲料添加剂来预防疾病的发生，提高饲料的转化率，促进动物生长。但长期用药所产生的不良反应、在畜禽产品中的残留、耐药性的增加以及在环境中的生态效应等已引起国内外的广泛关注。我国规定了牛、鸡、猪、羊等动物组织中达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星（环丙沙星与恩诺沙星量之和）、沙拉沙星等喹诺酮类兽药最高残留限量为10~1900μg/kg，磺胺类兽药总量的最高残留限量为100μg/kg；欧盟规定在动物组织中达氟沙星、二氟沙星、恩诺沙星（环丙沙星与恩诺沙星量之和）、麻保沙星、沙拉沙星等喹诺酮类兽药最高残留限量为10~1900μg/kg，磺胺类兽药的最高残留限量与我国相同；而美国FDA明确规定肉中磺胺二甲嘧啶残留量要小于100μg/kg，并且禁止在食源性动物中使用氟喹诺酮类兽药。

目前，动物源性食品中SAs和FQs残留的检测手段主要包括微生物法、高效液相色谱法（HPLC）、酶联免疫法（ELISA）、高效毛细管电泳法（HPCE）、放射免疫法和荧光光度法等。由于兽药性质差别较大，现有的残留分析一般按照化学结构类似的同族药物来建立相应的检测方法，而这些分析方法多集中在对单类抗生素的同时检测上，而对多类抗生素同时检测的方法研究较少，不能满足目前兽药种类不断增加、分析通量不断提高的需求。目前也有关于液相色谱-质谱联用技术的研究，该方法术灵敏度高，选择性和特异性好，能对低浓度的样品进行准确的定性确认，但样品前处理过程复杂，仪器化程度高且价格昂贵，分析速度慢，仅适用于样品的确证分析，不适合大批量样品的筛选及现场检测。与之相比，胶体金免疫层析法检测时间短、稳定性好、操作简便、无需其他仪器设备，结果判断直观可靠，适用于对现场大批量样品进行快速筛选，对控制多类抗生素残留具有重要意义。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种同时检测磺胺类药物和氟喹诺酮类药物的试纸条。

本发明所提供的试纸条包括微孔试剂和试纸，微孔试剂具有微孔塞，试纸包括底板、样品吸收垫、反应膜、吸水垫、保护膜，其依次连接；所述微孔试剂中冻干有磺胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物和氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物；反应膜上包括两条检测线和一条质控线，两条检测线上分别包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物和氟喹诺酮类药物半抗原-载体蛋白偶联物，质控线上包被有羊抗鼠抗抗体。

所述磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物由磺胺类药物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述氟喹诺酮类药物半抗原-载体蛋白偶联物由氟喹诺酮类药物半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白可为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白、人血清白蛋白。

所述磺胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物中的磺胺类药物单克隆抗体是以磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得，所述氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物中的氟喹诺酮类药物单克隆抗体是以氟喹诺酮类药物半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。

所述样品吸收垫上粘贴有保护膜，为检测端，上面有MAX标记线。

所述检测线位于近于有MAX标记的保护膜的一端，所述质控线位于远离有MAX标记的保护膜的一端。

所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜；所述保护膜为PE材质保护膜。

本发明的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：

1）制备冻干有磺胺类药物单克隆抗体-胶体金标记物和氟喹诺酮类药物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂；

2）制备具有分别包被有磺胺类药物半抗原-载体蛋白偶联物和氟喹诺酮类药物半抗原-载体蛋白偶联物的两条检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；

3）将2）制备好的反应膜与样品吸收垫、吸水垫、保护膜、底板组装成试纸；