[发明专利]一种藻红蛋白标记抗STI抗体、制备方法及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种抗体，尤其涉及一种藻红蛋白标记抗体、制备方法及其用途。

背景技术

我国是水产品生产大国，2010年水产品总产量达到了5373万吨，其中水产品加工产量为1778万吨，水产品加工业已经成为我国渔业生产中发展速度快、经济社会效益显著的重要支柱产业。鱼糜制品是大宗低值鱼类加工利用的一个重要方向。据统计，在2010年我国鱼糜制品产量达到了96万吨。近年来，随着鱼糜原料价格的大幅上涨，非鱼肉蛋白被添加到了鱼糜制品中。其中，大豆蛋白在原料鱼浆以及生产过程中普遍使用，使得鱼糜制品生产相关企业在原料把关上存在严重的挑战，鱼糜制品的有效成分和品质也难于得到保证，损害了消费者的利益和企业的长远发展。但是目前国内尚未有有效的方法检测鱼糜制品中的大豆蛋白，亟需建立一种快速、有效的检测方法。                                                                                                                                    

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种快速、准确、安全的检测大豆蛋白的藻红蛋白标记抗大豆胰蛋白酶抑制剂（soybean trypsin inhibitor，STI）抗体。

为实现上述目的，本发明提供一种藻红蛋白标记抗STI单克隆抗体，其特征在于，由藻红蛋白偶联抗STI单克隆抗体组合而成。所述藻红蛋白与抗STI单克隆抗体均分别进行了处理；优选为藻红蛋白通过SPDP (3-(2-吡啶二巯基)丙酸N-羟基琥珀酰亚胺酯)和DTT(二硫苏糖醇)处理；抗STI单克隆抗体通过SPDP处理。具体处理方法为：

藻红蛋白的处理：一定量的R-藻红蛋白与SPDP在恒温摇床反应，100 rpm/min，20-30 ℃，反应1 h，反应结束后过脱盐柱去除多余的SPDP，并用10 kDa膜浓缩；加入一定量的DTT于上述SPDP处理的R-藻红蛋白，20-30 ℃恒温摇床反应，100 rpm/min，反应时间为30 min，反应结束后过脱盐柱或透析去除多余的DTT，并用10 kDa膜浓缩，得到处理后的藻红蛋白；

抗STI单克隆抗体的处理：一定量的抗STI单克隆抗体与SPDP在恒温摇床反应，100 rpm/min，20-30 ℃反应1 h，反应结束后过脱盐柱或透析去除多余的SPDP，并用10 kDa膜浓缩，得到处理后的抗STI单克隆抗体；

再将上述SPDP处理后的藻红蛋白和处理后的抗STI单克隆抗体混合，在恒温摇床反应，100 rpm/min，20-30 ℃反应16-18 h，得到藻红蛋白偶联抗STI单克隆抗体复合物；

收集：将获得的藻红蛋白偶联抗STI单克隆抗体复合物过凝胶过滤柱，获得藻红蛋白标记的抗体。

所述藻红蛋白与SPDP的比例为摩尔比为1:80-1:100。

所述DTT与所述SPDP标记的R-藻红蛋白的反应浓度为摩尔比为1:100-1:400。

所述抗STI单克隆抗体与SPDP摩尔比为1:80-1:100。

本发明还保护依据上述制备方法所得的藻红蛋白标记抗STI抗体。

本发明还保护藻红蛋白标记抗STI抗体的用途，优选为检测鱼糜制品中大豆蛋白的用途。

本发明还进行了免疫荧光方法与化学发光方法的比较试验，结果表明免疫荧光法比化学发光法灵敏度更高，且反应时间更短。利用免疫荧光法能够检测到1.56 μg/mL STI。化学发光法能够检测到3.12 μg/mL STI。

本发明进行了未添加大豆蛋白的自制鱼丸和市售鱼丸中大豆蛋白的检测试验，八种材料分别为未添加大豆蛋白的自制鱼丸、鱼豆腐、福州鱼丸、A公司墨鱼鱼丸、B公司墨鱼鱼丸、花枝鱼丸、章鱼鱼丸，含2 %（w/w）大豆蛋白的鱼丸。结果表明：未添加大豆蛋白的自制鱼丸，没有对应STI蛋白（21 kDa）的条带，说明该抗体特异性良好。2 %大豆蛋白添加量（w/w）的鱼丸，STI条带清晰明显；鱼豆腐的条带最亮，说明鱼豆腐中的大豆蛋白含量最高。其次为A公司墨鱼鱼丸和福州鱼丸，添加量为2 %左右。虽然B公司墨鱼鱼丸、花枝鱼丸、章鱼丸包装上未标注含大豆蛋白，但泳道5、6、7显示也含有一定量的大豆蛋白，该结果与化学发光法一致。