[发明专利]一种筛选抗蓝耳病猪的CYP3A88分子标记育种方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及分子遗传学领域，具体涉及了一种筛选抗蓝耳病猪的育种方法，通过判断猪CYP3A88基因5′调控区突变位点的多态性来进行选种，并人为地应用该突变位点实现抗蓝耳病猪的育种。 

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）又称蓝耳病，是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染猪肺巨噬细胞所致的猪繁殖与呼吸系统疾病，是危害世界养猪业的首要传染病（Neumann et al.2005）。该病主要引起妊娠母猪发热、早产、木乃伊胎和弱仔等繁殖障碍以及各年龄段猪的呼吸道症状和高死亡率（Rossow1998）。猪的抗病性状属于中等遗传力水平的阈性状，由病毒引起的呼吸道疾病的抗性是可以遗传的。越来越多的证据也表明猪对PRRSV的抗性存在遗传差异（Ait-Ali et al.,2007,Ait-Ali et al,2011;Bates et al.,2008;Petry et al.,2005,2007;Vincent et al.,2005;Vincent et al.,2006）。Petry等(2005)比较了内布拉斯加指数系和汉普夏-杜洛克杂交猪对PRRSV感染后反应的差异，检测了这两种猪的体重的变化，直肠温度和病毒滴度等指标，结果表明内布拉斯加指数系具有较强的抗性；Petry等（2007)又发现在这两种猪中，肺脏和淋巴结组织中特异的免疫功能基因和细胞因子的表达水平存在差异；Bates等(2008)利用基因芯片技术在这两种猪肺脏和淋巴结中筛选差异表达的基因，结果发现大量基因表达存在差异。Vincen等(2006)利用流式细胞仪测定外周血单核巨噬细胞对PRRSV感染率的差异，将猪群分为高易感和低易感2个系，于6周龄接种病毒，发现高易感系在接种21d后临床症状更严重，且高易感系血清病毒滴度比低易感系高。Reiner等（2010）比较了德国地方品种小型猪和皮特兰猪感染PRRSV后的临床状态，病毒量和血清抗体转换情况，发现皮特猪在感染后6d，病毒量达到最高，感染率为100%，小型猪在感染12d后病毒量达到高峰，感染率为87%，皮特兰猪病毒复制量比小型猪高，小型猪产生更有效的抗体，结果表明这两种猪对PRRSV的反应存在遗传差异。 

从蓝耳病的流行病学调查可以看出，易感猪多数为西方瘦肉型猪而我国的地方猪种染病的较少。即使在以我国地方猪种为亲本的配套系中感染PRRSV的情况也较轻。大蒲莲猪是山东省体型较大的华北型黑猪，具有抗病耐粗、多胎高产、哺育能力强、肉质好等优良特性。调查显示，自2006年以来，在大批西方瘦肉型猪感染蓝耳病死亡的情况下，大蒲莲猪及大蒲莲猪为母本的二元杂交猪均表现出对PRRSV超强的抗病能力。因此如何利用该特性研究对PRRSV超强的抗病能力，成为本领域急需解决的问题。 

发明内容

基于上述的原因，本发明通过筛选出猪抗蓝耳病相关的基因标记，建立猪分子标记辅助育种方法，为猪抗蓝耳病品种培育提供基因标记和技术方法。根据现有技术，发明人通过进一步的实验发现猪CYP3A885′调控区－78位点的A到T突变在体外试验中改变了CYP3A88启动子的活性，两者差异显著，可见检测与突变相关联的分子标记不仅方法简便快速，而且 不受环境影响，并可实现早期选种。 

细胞色素P450酶系(cytochrome P450,CYP)是一组含亚铁血红素的酶，参与了许多内源性物质如类固醇、脂肪酸、胆酸、维生素D3,前列腺素、儿茶芬胺和许多进入体内的外源性物质如药物、杀虫剂、毒物和致癌物的代谢（Gueguen et al.2006;Nebert et al.2002）。目前已知的猪CYP3A亚家族蛋白共有4种亚型:CYP3A22、CYP3A29、CYP3A39和CYP3A88；其中，CYP3A29是研究得最多的亚型，研究表明其具有典型的硝苯地平氧化活性(人体内CYP3A4和3A5的特异活性)，且能被苯巴比妥，利福平和地塞米松诱导，而CYP3A22、CYP3A39和CYP3A88的研究资料则相对缺乏。