[发明专利]一种用于细胞培养的生物凝胶膜、制备方法及其应用有效

申请号：	201310017636.2	申请日：	2013-01-17
公开（公告）号：	CN103087533A	公开（公告）日：	2013-05-08
发明（设计）人：	李萌	申请（专利权）人：	黑龙江省重生生物科技有限公司
主分类号：	C08L89/00	分类号：	C08L89/00;C08L5/08;C08K5/521;C08J3/075;C12N5/071;C12N5/0735
代理公司：	北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139	代理人：	孙皓晨;韩小雷
地址：	150028 黑龙江省哈尔滨市松北区世乾***	国省代码：	黑龙江;23
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摘要：
搜索关键词：	一种用于细胞培养生物凝胶制备方法及其应用
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【权利要求书】：

1.一种用于细胞培养的生物凝胶膜，其特征在于所述生物凝胶膜包含有Matrigel、氯化壳聚糖以及明胶。

2.如权利要求1所述的生物凝胶膜，其特征在于所述生物凝胶膜按照以下方法制备得到：

（1）称取一定量氯化壳聚糖，将其溶于去离子水中，制备成质量分数为1%-2%的氯化壳聚糖溶液，搅拌直至全部溶解，备用；

（2）称取一定量明胶，将其溶于去离子水中，制备成质量分数为1%-2%的明胶溶液，搅拌直至全部溶解，备用；

（3）取一定体积的Matrigel溶液，在其中加入一定量的去离子水形成蛋白浓度为9-15mg/ml的Matrigel溶液，整个操作过程需在冰上操作；

（4）按照1-2:1体积比量取一定量的步骤（1）制备的氯化壳聚糖溶液和步骤（2）制备的明胶溶液，混合搅拌，过滤灭菌备用；

（5）称取一定量的磷酸甘油钠溶于去离子水中，形成质量浓度为10%的磷酸甘油钠溶液，过滤灭菌备用；

（6）在超净工作台中量取（4）制备的混合溶液5ml，在其中加入（3）制备的Matrigel溶液0.1-1ml，加入0.1-2ml步骤（5）配制的磷酸甘油钠溶液，混合搅拌2-10min，然后将其倒入细胞培养器皿或细胞培养板中，以上过程需在冰上操作；然后将其置于37℃培养箱中孵育10-40min，便可形成用于细胞培养的生物凝胶膜。

3.制备权利要求1或2所述的用于细胞培养的生物凝胶膜的方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）称取一定量氯化壳聚糖，将其溶于去离子水中，制备成质量分数为1％-2%的氯化壳聚糖溶液，搅拌直至全部溶解，备用；

（2）称取一定量明胶，将其溶于去离子水中，制备成质量分数为1%-2%的明胶溶液，搅拌直至全部溶解，备用；

（3）取一定体积的Matrigel溶液，在其中加入一定量的去离子水形成蛋白浓度为9-15mg/ml的Matrigel溶液，整个操作过程需在冰上操作；

（4）按照1-2:1体积比量取一定量的步骤（1）制备的氯化壳聚糖溶液和步骤（2）制备的明胶溶液，混合搅拌，过滤灭菌备用；

（5）称取一定量的磷酸甘油钠溶于去离子水中，形成质量浓度为10%的磷酸甘油钠溶液，过滤灭菌备用；

4.权利要求1或2所述的生物凝胶膜在培养细胞中应用。

5.一种细胞培养方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）将细胞以一定的密度种植在权利要求1或2所述的生物凝胶膜上，常规培养一定的时间，隔天换液；

（2）当细胞铺满整个生物凝胶膜时，将其置于4℃，10-30min，加入少量的消化细胞酶，离心收集细胞。

6.如权利要求5所述的方法，其特征在于所述的细胞为心肌细胞，胚胎干细胞或诱导多能干细胞。

7.如权利要求4所述的方法，其特征在于细胞种植密度为1×10⁴个/cm²。