[发明专利]一种大量提取活性上皮细胞的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种大量提取活性上皮细胞的方法。

背景技术

皮肤是人体最大的器官，除了各种生理功能之外还直接关系到人的形象、美丽与健康。因此，对皮肤上皮细胞的研究既是医学工程也是美丽工程。

做为皮肤的最外层，除了掌跖部位之外，上皮一般分为四层，从外向里依次为：

(1)失去活性的角质层，随年龄、性别、人种而略有不同，一般为5-10层，掌跖部位可厚达40-50层；

(2)处于活性上皮细胞与死亡的角质细胞过渡时期的颗粒层，一般约2-4层；

(3)仍具备分裂增殖能力的棘细胞层，由4-8层棘细胞组成；

(4)分裂增殖能力最为旺盛的基底层，也称为生发层，由单层圆柱状基底细胞组成。

以往采集上皮细胞的方法一般是取全层或中厚层皮肤然后再用机械的方法或酶切的方法去除各种不需要的组织结构，筛选出有活性的上皮细胞（即基底层细胞或棘层细胞），不仅费时费力、劳民伤财，而且大量活性上皮细胞在采集过程中受到伤害，影响它的成活率，使活性上皮细胞的数目大大下降，同时取皮部位也会留下不同程度的瘢痕，不适于上皮细胞的商业化运用。

发明内容

为了有效的解决现有技术中存在的难题，本发明提供了一种大量提取活性上皮细胞的方法，所述的方法包括如下步骤：

第一步：首先用磨皮的方法去掉角质层以及部分颗粒层细胞；

第二步：以滚轴取皮刀取刃厚皮片；

第三步：将取下的刃厚皮片平铺于大硅胶板上；

第四步：采用微粒切割刀将刃厚皮片切割成微型组织块；

第五步：将微型组织块放入胰酶中在0-40摄氏度消化1-10分钟，使组织松散成细胞或细胞团状；

第六步：中和胰酶并离心清洗，0-40摄氏度保存待用。

本发明的优点是：

1、首先去除了无活性的角质上皮与少量缺乏活性的颗粒细胞；

2、刃厚皮片取皮又减少了皮下组织，使得所取皮肤90%以上是活性上皮组织；

3、用特制的微型切皮刀锐性的将活性上皮块迅速切割成微型上皮组织，大大减少了活性上皮组织的损伤；

4、用胰酶将微型上皮消化成活性上皮细胞及细胞团，又避免了过渡酶切造成的伤害，提升了活性上皮细胞及细胞团的活性；

5、根据理论和实践研究，上皮细胞团的活性远远大于单个上皮细胞的活性，更具有商业运用价值。

附图说明

图1是本发明的大量提取活性上皮细胞的方法的流程图；

图2a是本发明中采用的微粒切割刀的截面示意图；

图2b是本发明中采用的微粒切割刀的切刀设计示意图。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进行详细说明。

本发明提供一种大量提取活性上皮细胞的方法，如图1所示流程，具体包括如下步骤：

第一步：首先用磨皮的方法轻轻去掉角质层以及部分颗粒层细胞，以皮肤露出粉红色为度；所述的磨皮的方法包括机械、激光或化学磨皮等方法。一般去除颗粒层1～3层。

第二步：以滚轴取皮刀按所需大小取刃厚皮片；所述滚轴取皮刀设定厚度为0.15～0.25mm，最薄的厚度约0.2mm，所取皮肤的厚度设定为0.15～0.25mm。

第三步：将取下的刃厚皮片平铺于大硅胶板上。

所述的大硅胶板尺寸约为10×10cm²，用以承载取下的皮片，硅胶板可以采用塑料、木质或橡胶、硅胶等材料，硬度小于金属材料的硬度，但是又能承载切割和满足容易切割的要求。

第四步：采用微粒切割刀将刃厚皮片切割成微型组织块。

所述的微粒切割刀如图2a和图2b所示，厚度为0.5～2cm。包括一体成型加工的切割面2和锤击面1两部分，所述的切割面2为网格设计的切刀，切刀具有非常锐利的刀锋，为切刀的刀刃，如图1所示，切刀设计成细密的网格状；每个网格的尺寸0.02～2mm，尺寸越小越好，一般优选为0.02～1mm。

所述的锤击面1为非切割面，相对切割面较厚钝，用于承载敲击力，锤击面1一般为2×2cm的钝型方块。

切割时，只需把取下的刃厚皮片平铺于大块硅胶板上，以小块硅胶板平置锤击面上，切刀对准要切割的大块硅胶板上的刃厚皮片，适度锤击即能得到微型组织块。根据需要，一般还可选择多个微粒切割刀同时平置在大块硅胶板上的皮肤组织上，以敲击锤均匀而快速的敲击小块硅胶板，即能迅速得到大量微型上皮组织块，可供直接或进一步使用。