[发明专利]猕猴桃灵芝复合酵素及其制备方法

权利要求书

1.猕猴桃灵芝复合酵素，其特征在于，所述复合酵素的制备方法包括以下步骤：

1）将去除表面柔毛的猕猴桃洗净，然后在臭氧水中进行过流式浸没杀菌；将杀菌后沥干的猕猴桃打浆；

2）将水果洗净，然后在臭氧水中进行过流式浸没杀菌；所述水果任选刺梨、梨、火龙果、李子、桔子、柠檬、苹果、葡萄、草莓中的至少一种；

将杀菌后沥干的桔子、柠檬、火龙果去皮压烂；刺梨、梨、李子、苹果切成小块，果核或籽保留完好；将葡萄、草莓压烂，葡萄籽保留完好；

3）将处理好的猕猴桃、刺梨、梨、火龙果、李子、桔子、柠檬、苹果、葡萄和草莓分别按70:4:4:2:2:5:2:3:5:5的重量比混合；

4）将西红柿洗净，然后在臭氧水中进行过流式浸没杀菌；将杀菌后沥干的西红柿压烂；

5）灵芝发酵物的制备：

a）斜面菌种培养：将灵芝菌接种斜面，28℃±1℃培养8d；

b）液体菌种的制备：将斜面菌种直接转接至液体种子培养基中，28℃±1℃，150rpm振荡培养5-6d，制备得到液体种子液；

c）扩大培养：将灵芝菌液体种子液按10%的接种量转接至扩大培养基中，28℃±1℃，30rpm振荡培养20d，然后静置培养40d；

6）乳酸菌混合发酵液的制备：

d）斜面菌种培养：将嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)、植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)和鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)分别接种斜面，37℃±1℃培养24-32h；

e）液体菌种的制备：分别将嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌斜面菌苔用无菌水制备成菌悬液，按10%的接种量分别转接至液体种子培养基中，37℃±1℃，35rpm振荡培养12-24h；然后用无菌水调菌浓度为1×10⁸-2×10⁸cfu/mL，制备得到液体种子液；

f）扩大培养：分别将嗜酸乳杆菌、发酵乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和鼠李糖乳杆菌的液体种子液按15%的接种量转接至扩大培养基中，37℃±1℃，35rpm振荡培养24-28h，制备得到各乳酸菌发酵液；

g）将上述各乳酸菌发酵液按等比例混合，即得到乳酸菌混合发酵液；

7）酵母发酵液的制备：

h）斜面菌种培养：将柠檬形克勒克氏酵母(Kloeckera apiculata)接种斜面，30℃±1℃培养18-24h；

i）液体菌种的制备：将果酒酵母菌苔用无菌水制备成菌悬液，按10%的接种量转接至液体种子培养基中，30℃±1℃，125rpm振荡培养8-12h；然后用无菌水调整菌浓度为1×10⁸-2×10⁸cfu/mL，制备得到液体种子液；

j）扩大培养：将果酒酵母液体种子液按15%的接种量转接至扩大培养基中，30℃±1℃，75rpm振荡培养8-12h，制备得到酵母发酵液；

8）醋酸菌发酵液的制备：

k）斜面菌种培养：将巴氏醋酸杆菌（Acetobacer pasteurianus）接种斜面，30℃±1℃培养24-36h；

l）液体菌种的制备：将醋酸杆菌用无菌水制备成菌悬液，按10%的接种量转接至液体种子培养基中，30℃±1℃，30rpm振荡培养24-36h；然后用无菌水调整菌浓度为1×10⁸-2×10⁸cfu/mL，制备得到液体种子液；

m）扩大培养：将醋酸杆菌液体种子液按13%的接种量转接至扩大培养基中，30℃±1℃，30rpm振荡培养8-12h，制备得到醋酸菌发酵液；

9）将乳酸菌混合发酵液按每1000ml/100kg西红柿的量接入步骤4）处理好的西红柿中，搅拌混合，在30±4℃的条件下密封发酵60d；

10）将酵母发酵液按每700ml/100kg水果的量接入步骤3）处理好的水果中，搅拌混合，在30±4℃的条件下密封发酵60d；

11）将步骤9）和步骤10）中得到的发酵物与步骤5）的灵芝发酵物按6:1:3的重量比混合，在30±4℃的条件下密封发酵40-60d；

12）将步骤11）中得到的发酵物与步骤8）的醋酸菌发酵液按900ml醋酸菌发酵液/100kg发酵物的比例混合，在30±4℃的条件下密封发酵50-60d；最后将所得发酵物过滤，滤液经低温真空浓缩，即得猕猴桃灵芝复合酵素。