[发明专利]一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法

权利要求书

1.一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法是按以下步骤完成的：

一、配制LB液体培养基：将酵母膏、蛋白胨和NaCl加入水中混合至完全溶解，在温度为120℃的条件下灭菌20min，灭菌后冷却到60℃~50℃；其中所述的蛋白胨与酵母膏的质量比为(1.5~2.5):1，所述的NaCl与酵母膏的质量比为(1.5~2.5):1，所述的酵母膏的质量与水的体积比为1g:(950~1100)mL；

二、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其加入大肠杆菌野生型菌株菌液，在温度为37℃、振荡速度为60r/min条件下恒温震荡培养10h，即得到平台期菌液；其中所述大肠杆菌野生型菌株菌液与称取的步骤一得到的LB液体培养基的体积比为(1~2):100；

三、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其加入步骤二得到的平台期菌液，得到稀释平台期菌液；所述加入步骤二得到的平台期菌液与称取步骤一得到的LB液体培养基的体积比为(1~2):100；

四、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其中加入锰离子，配制成锰离子浓度分别为0.1mg/L、0.3mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/、5mg/L和10mg/L的含锰的LB液体培养基，然后将步骤三得到的稀释平台期菌液加入到含锰的LB液体培养基中，在温度为37℃、振荡速度为60r/min条件下恒温震荡培养4h，得到培养后的菌液；所述的步骤三得到的稀释平台期菌液与含锰的LB液体培养基的体积比为(1~2):100；

五、采用紫外分光光度计于波长600nm处检测步骤四得到的培养后的菌液中大肠杆菌生长的OD值；

六、根据步骤五得到的数据，以步骤四得到的培养后的菌液中锰离子浓度为横坐标，相对应的OD值为纵坐标，建立标准曲线，并得到二元一次线性回归方程；

七、称取步骤一得到的LB液体培养基，向其中加入未知含锰水样，得到含有未知含锰水样的LB液体培养基，然后将步骤三得到的稀释平台期菌液加入到含有未知含锰水样的LB液体培养基中，在温度为37℃、振荡速度为60r/min条件下恒温震荡培养4h，得到培养后的含有未知含锰水样的菌液；所述未知含锰水样与称取步骤一得到的LB液体培养基的体积比为1:(500~1000)，所述步骤三得到的稀释平台期菌液与含有未知含锰水样的LB液体培养基的体积比为(1~2):100；

八、采用紫外分光光度计于波长600nm处检测步骤七得到培养后的含有未知含锰水样的菌液中大肠杆菌生长的OD值；

九、将步骤八得到的OD值通过步骤六得到的二元一次线性回归方程，计算即得到未知含锰水样中锰含量；即完成利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量。

2.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤一中所述的蛋白胨与酵母膏的质量比为2:1,所述的NaCl与酵母膏的质量比为2:1，所述的酵母膏的质量与水的体积比为1g:1000mL。

3.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤一中所述的水为蒸馏水或高纯水。

4.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤一中在温度为120℃的条件下灭菌20min，灭菌后冷却到60℃。

5.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤三中所述的加入步骤二得到的平台期菌液与称取步骤一得到的LB液体培养基的体积比为1:100。

6.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤七中所述的步骤三得到的稀释平台期菌液与含有未知含锰水样的LB液体培养基的体积比为1:100。

7.根据权利要求1所述的一种利用大肠杆菌生长OD值检测污水中锰含量的方法，其特征在于步骤七中所述的加入未知含锰水样与称取步骤一得到的LB液体培养基的体积比为1:1000。