[发明专利]一种家蚕幼虫体1-脱氧野尻霉素含量的测定方法

权利要求书

1.一种家蚕幼虫体1-脱氧野尻霉素含量的测定方法，其特征在于：

1）家蚕幼虫于-50℃下真空干燥36 h，于-15℃下超微粉碎10~15 min，过80~100目筛，得到家蚕幼虫粉；

2）取家蚕幼虫体粉，按重量体积比为1：700~800比例，加入0.05 mol/L HCl，常温下涡流15~20 s并超声波处理20~30 min后，用21690 g离心20 min，收集上清液，沉淀物再按上述步骤提取一次，合并两次上清液，定容得供试液；

3）取10 μL供试液，与10 μL 0.4 mol/L、pH8.5的硼酸钾缓冲液混和，加入20 μL 5 mmol/L FMOC-Cl液，混匀并在20℃水浴锅中反应20~25 min，加10 μL 0.1mol/L甘氨酸液，中和剩余的FMOC-Cl来终止反应；

4）反应液用950 μL质量百分比为 0.1%醋酸液稀释，生成的DNJ-FMOC，并用孔径0.2 μm尼龙吸管式过滤器过滤，得测定液；

5）将10 μL测定液用进样器注入色谱柱为DIAMONSIC C₁₈柱的Waters 600高效液相色谱仪，以体积比为1：1的乙腈-0.1%醋酸为流动相，按1.0 mL/min流速在常温下洗脱；

6）用激发光254 nm、发射光322 nm 的Waters 474荧光检测器检测洗脱曲线，根据DNJ-FMOC色谱峰面积按回归方程Y=0.0002X+ 2.9815计算出1-脱氧野尻霉素含量。