[发明专利]一种用于禽肺病毒A亚群特异性检测的荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种荧光定量RT-PCR检测试剂盒，特别涉及一种用于禽肺病毒A亚群特异性检测的荧光定量RT-PCR试剂盒及其应用，属于病毒检测领域。

背景技术

禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）又称火鸡鼻气管炎病毒(turkyrhinotracheits virus,TRTV)。禽肺病毒属于副粘病毒科，肺病毒亚科，偏肺病毒亚属。禽肺病毒引起的疾病最早在火鸡上发现，该病毒引起火鸡的呼吸道疾病并导致产蛋量下降。在鸡上禽肺病毒是引起肿头综合征的重要因素，但APV的致死率不高（2%～5%）。自1978年南非首次报道APV，欧洲和中东多次报道APV，在世界的许多地方APV对火鸡和鸡造成严重的威胁。根据编码禽肺病毒G蛋白的基因不同将欧洲病毒株分为两个亚型，即A亚型APV（APV/A）（英国）和B亚型APV（APV/B）（欧洲大陆）。APV/A亚型与APV/B亚型相似，但G蛋白只有38%的相似率，这两个亚型在欧洲广泛流行。APV/A亚型在南非和英格兰首次分离到：在亚洲的日本、韩国、黎巴嫩和以色列等国家有针对于APV/A亚型的报道。我们对国内的鸡群进行了禽肺病毒血清学调查，结果显示APV普遍感染，发现有的祖代种鸡场的抗体阳性率有的高达100%，这应该引起中国养禽业的足够重视。但尚未知道是哪一种亚型的APV引起的，建立一种快速、灵敏的诊断方法且能快速分型对诊断和控制APV极为重要。尤其是APV/A亚群，中国临近国家如日本、韩国和以色列等已有APV/A亚群的流行的报道，极有可能对中国的养鸡业造成危害。在2008年已有报道在中国东南方的鸡市场检测到APV/A亚群。因此建立一种针对APV/A亚群的高效的诊断方法是当务之急。

荧光定量PCR是近年来发展起来的新技术，具有快速、灵敏、特异性强等优点，非常适用于病毒感染的检测，尤其是感染的早期诊断，该方法不仅能精确定量，而且由于其具有探针与引物的双重特异性，从而减少了假阳性。目前，APV的实验室常规诊断方法主要是RT-PCR，但是该方法在用于APV检测时仍在敏感性、特异性和时效性等方面均存在不足，特别是在该病的早期诊断中体现得尤为明显。

本研究为针对A亚群APV检测的荧光定量RT-PCR的检测试剂盒及其应用，本发明的检测试剂盒具有良好的敏感性和特异性，方便快捷且同时能够区分亚群，为APV的早期、分型检测提供了强有力的诊断方法，同时为APV感染、增殖规律的研究提供了重要的检测技术手段，对APV的临床诊断和致病机理的研究具有一定应用价值。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种用于禽肺病毒（Avian pneumovirus,APV）A亚群特异性检测的荧光定量RT-PCR检测试剂盒。

为达到以上目的，本发明采用的技术手段为：