[发明专利]高速逆流色谱分离制备高纯度DHA方法

权利要求书

1.一种提取二十二碳六烯酸的方法，包括如下步骤：

1）将微藻油进行皂化处理，得到皂化处理后溶液；

2）将所述皂化处理后溶液进行高速逆流色谱分离，得到二十二碳六烯酸；

所述微藻油为从微藻细胞中提取的油脂。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：

步骤2）中，所述高速逆流色谱采用的溶剂为正庚烷-乙腈-乙酸-甲醇混合液；所述正庚烷-乙腈-乙酸-甲醇混合液为将正庚烷、乙腈、乙酸和甲醇按照体积比为4:5:1:1混合得到；

所述高速逆流色谱的转速为850-900rpm；所述高速逆流色谱的溶剂的流速为2-3mL/min；

所述高速逆流色谱的溶剂的下相为流动相，溶剂的上相为固定相。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：

步骤1）中，所述皂化处理为将微藻油在氢氧化钾–甲醇溶液中进行皂化处理，具体按照包括如下步骤的方法进行：

A、将所述微藻油与所述氢氧化钾–甲醇溶液混合后，调pH值为酸性，得到酸性混合液；

B、用乙醚萃取所述酸性混合液，收集乙醚相；

C、去除所述乙醚相中的乙醚，再溶解，得到皂化处理后溶液；

步骤2）中，所述高速逆流色谱的转速为900rpm；

所述高速逆流色谱的溶剂的流速为3mL/min。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：

步骤A中，所述氢氧化钾-甲醇溶液的浓度为0.4-0.6mol/L；

所述微藻油和所述氢氧化钾-甲醇溶液的配比为（18-22）mg：1ml；

所述混合为在65-75℃水浴下混合1-2h；

所述调pH值采用浓度为20%的硫酸水溶液，所述调pH值为酸性为调pH值为1-3；

步骤B中，所述用乙醚萃取所述酸性混合液为将所述酸性混合液和所述乙醚等体积混匀萃取；

步骤C中，所述去除所述乙醚相中的乙醚采用旋转蒸发去除；

所述溶解所需的溶剂为所述正庚烷-乙腈-乙酸-甲醇混合液静置后的下相。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：

步骤A中，所述氢氧化钾-甲醇溶液的浓度为0.5mol/L；

所述微藻油和所述氢氧化钾-甲醇溶液的配比为20mg：1ml；

所述混合为在70℃水浴下混合1.5h；

步骤B中，所述萃取的次数为3次。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：

所述微藻为裂壶藻Schizochytrium sp.；所述裂壶藻Schizochytrium sp.具体为裂壶藻Schizochytrium sp.TIO1101CGMCC No.4603。

7.高速逆流色谱在从微藻中提取DHA中的应用；所述微藻具体为裂壶藻Schizochytrium sp.；所述裂壶藻Schizochytrium sp.进一步具体为裂壶藻Schizochytrium sp.TIO1101CGMCC No.4603。