[发明专利]一种凝固酶阴性葡萄球菌选择性培养基及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体涉及一种凝固酶阴性葡萄球菌选择性培养基及其制备方法。

背景技术

葡萄球菌是临床较常见的感染菌，随着大量头孢菌素尤其是第三代头孢菌素等高效广谱抗菌药物的广泛使用，耐甲氧西林葡萄球菌（MRS）在全球范围内不断增加，耐甲氧西林凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）作为MRS和凝固酶阴性葡萄球菌（CNS）家族中的一员，其检出率和多重耐药性呈逐年增高趋势，已成为医院感染的主要病原菌之一。CNS为低毒力条件致病菌，感染后症状不典型，且呈现多重耐药现象，给临床诊断和治疗带来一定困难，高效可靠的检验方法已是必然需要。

目前CNS的测定方法为利用玻片法、试管法检测凝聚因子，但有10%～15%假阴性率，故而在复杂病例的诊断，或者进行CNS治疗药物敏感度筛查实验、药理实验、药效实验时，需要进行进一步的微生物培养。

所谓微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的选择性培养基，利用这种选择性培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。

目前临床上普遍使用的葡萄球菌选择性培养基为甘露醇高盐琼脂（Manitol Salt Agar），用于金黄色葡萄球菌的选择性分离培养。培养基成分为：蛋白胨、鸡蛋蛋白液、D-甘露醇、氯化钠、酚红、琼脂。金黄色葡萄球菌菌落为黄色，大肠杆菌和沙门氏菌菌落为无色。但是，该种培养基并不能选择性培养凝固酶阴性葡萄球菌（CNS），其原因在于在目前的选择性培养基中金黄色葡萄球菌比凝固酶阴性葡萄球菌生长更快，很快覆盖了培养基，CNS无法生长。

一份2011年7月6日公开，公开号为102119221A名为《能够区分金黄色葡萄球菌与凝固酶阴性葡萄球菌的培养基》的发明专利（申请号为200980131422.X）公开了一种用于生长、检测、鉴定和/或计数金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的特异性培养基，所述培养基特征在于其包含至少一种磷脂酶C的荧光、显色或发光底物。该发明中实施例的基础培养基源自Baird-Parker + RPF 培养基和Ottaviani Agosti琼脂培养基 （OAA）。但该种培养基为鉴别培养基，即通过使用一种特异性底物而简单的辨认金葡菌。该发明并未提供CNS选择培养的任何信息。

发明内容

本发明的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种对凝固酶阴性葡萄球菌分离率高的选择性培养基。

本发明解决其技术问题的技术方案是：一种凝固酶阴性葡萄球菌选择性培养基，其特征在，配制1000ml选择性培养基的配方中含有：

麦芽浸粉15g；

鸡蛋蛋白液150ml；

氯化钠5g；

枸橼酸镁0.5g；

琼脂15g；

假细锥甲素8~12mg；

天门冬素3.6g；

磷酸二氢钾0.2g；

蒸馏水加至1000ml。

优化方案中，每1000ml选择性培养基还含有硫酸铜5mg。

优化方案中，每1000ml选择性培养基还含有L-半胱氨酸0.1g。

优化方案中，每1000ml选择性培养基还含有浓度200g/L的百合水煮液200~300ml。

最优化方案中，每1000ml选择性培养基还含有硫酸铜5mg；L-半胱氨酸0.1g；浓度200g/L的百合水煮液200~300ml。

一种凝固酶阴性葡萄球菌选择性培养基的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）取百合加水煮沸1小时，过滤，取滤液，调整体积到浓度为200g/L，得百合水煮液；

（2）取麦芽浸粉；鸡蛋蛋白液；氯化钠；枸橼酸镁；琼脂；假细锥甲素；天门冬素；磷酸二氢钾；L-半胱氨酸及硫酸铜溶于步骤1所得百合水煮液中，混匀过滤后，蒸馏水定容，低温灭菌2次，每次45 min，灭菌后分装。