[发明专利]繁殖穿叶眼子菜的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及到一种沉水植物穿叶眼子菜的繁殖方法。

背景技术

近年来湖泊、水库富营养化问题的日益严重，水生态系统受到严重破坏。沉水植物是水生态系统中的初级生产者之一，具有净化水质和减缓底泥释放的能力，通过藻类的化感作用，抑制藻类的生长和繁殖。穿叶眼子菜应用于水生态系统工程中具有增加沉水植物种群多样性、提高水生态系统稳定性保证水体水质的功能。穿叶眼子菜作为高等水生植物是水生态构建、修复、调控中主要的生物材料之一。

穿叶眼子菜是多年生沉水草本，具有发达的根茎，在我国许多水体中都能生存，对水环境具有较宽的耐受能力和较强的适应能力。

目前穿叶眼子菜种苗主要从自然河流、湖泊中采集，由于从自然界采集的种苗含有大量污染物，如藻类、虫害及幼虫卵等。应用于水生态系统工程时，其植株生枝、发根能力弱，成活率低。因此通过人工培育具有无污物、生根和发芽能力强的穿叶眼子菜种苗是成功定植的关键。

发明内容

本发明的目的是克服水生态构建、修复、调控工程中，穿叶眼子菜种苗数量不足，成活率低，污染物多等缺点，因此本发明提供一种利用穿叶眼子菜茎芽进行无菌培养大量工程苗的繁殖方法，该方法能够有效解决穿叶眼子菜用于水生态构建、修复、调控工程时，其种苗数量不足、质量差、成活率低等缺点。

为了解决上述技术问题，本发明采取以下的技术方案：

一种繁殖穿叶眼子菜的方法，其特征在于包括下述步骤：

1）采集穿叶眼子菜，去除叶和根，用水冲洗1～2h后，取顶端含2～3个节的茎，用蒸馏水洗净茎；

2）先后用乙醇和次氯酸钠对茎消毒灭菌；

3）将茎接种到装有培养基的培养瓶中培养30～35天后即可繁殖新植株，所述的培养基经高温灭菌。

进一步的技术方案是：将培养长出的新植株作为新一代培养的母本，重复上述的步骤3），穿叶眼子菜可连续培养多代。

进一步的技术方案是：将新植株置于1/2霍格兰溶液中练苗15天后，可作为工程苗使用。

进一步的技术方案是：所述的培养基每升中包含下述重量的组分：蔗糖20～30克，NAA0.1～0.3毫克，6～BA0.3～0.6毫克，硝酸铵1650毫克，硝酸钾1900毫克，二水氯化钙440毫克，硫酸镁370毫克，磷酸二氢钾170毫克，碘化钾0.83毫克，硼酸6.2毫克，硫酸锰22.3毫克，硫酸锌8.6毫克，钼酸钠0.25毫克，硫酸铜0.025毫克，氯化钴0.025毫克，硫酸亚铁27.8毫克，乙二胺四乙酸二钠37.3毫克，肌醇100毫克，烟酸0.5毫克，盐酸吡哆醇0.5毫克，盐酸硫胺素0.1毫克，甘氨酸2毫克。

进一步的技术方案是：所述的1/2霍格兰溶液每2升包含下述重量的组分：硝酸钙945毫克，硝酸钾607毫克，磷酸铵115毫克，硫酸镁493毫克，硫酸亚铁13.9毫克，乙二胺四乙酸二钠37.3毫克，碘化钾0.83毫克，硼酸6.2毫克，硫酸锰22.3毫克，硫酸锌8.6毫克，钼酸钠0.25毫克，硫酸铜0.025毫克，氯化钴0.025毫克。

进一步的技术方案是：步骤2）中所述的用乙醇和次氯酸钠对茎消毒灭菌包括以下步骤：用体积分数为50%～70%乙醇浸泡灭菌30～60秒钟，然后用无菌蒸馏水冲洗3遍；再用质量分数为0.5～1%的次氯酸钠浸泡灭菌10～20分钟，再用无菌蒸馏水冲洗3遍。

进一步的技术方案是：步骤3）中所述的高温灭菌是在120～125摄氏度下，灭菌30～40min。

进一步的技术方案是：步骤3)中所述培养的条件为培养基pH5.8～6.0，温度20～28℃，光照强度1800～2500Lx，光照时间为每天8-12h。

本发明的有益效果是：

1）利用穿叶眼子菜的茎采用无菌培养基进行无菌培养，每2-3段茎可繁殖4-9新植株，无感染率达95%以上；采用培养长出的新植株作为母本培养的下一代新植株，无感染率达99%以上，新植株练苗后作为工程苗使用的成活率为99%以上，解决了穿叶眼子菜种苗数量不足，成活率低，污染物多等技术问题。

2）采用本发明培养穿叶眼子菜新植株的周期为45天左右，培养周期短，可快速大量的繁殖穿叶眼子菜，解决穿叶眼子菜种苗数量不足等问题。

3）本发明中配制的培养基可满足穿叶眼子菜的茎繁殖时所需的营养组分，促进穿叶眼子菜的茎快速繁殖。

具体实施方式

下面结合本发明具体的实施例对本发明作进一步的解释和说明。

实施例1：