[发明专利]一种耐热保护剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及活的微生物保存领域，具体涉及耐热保护剂及其应用。

背景技术

病毒等生物活性物质及其相关制品的热敏感性一直是活疫苗长期保存的瓶颈。我国幅员辽阔，经济水平差异较大，运输、使用过程中疫苗短期暴露高温环境（甚至45℃以上）的现象依然存在，所以对活疫苗的耐热性能提出了更高的要求。

耐热冻干保护剂考虑了活疫苗在较高温度和较长保存时间的情况下，冻干物质可能产生的物理和化学变化对活疫苗存活的影响。但是，现有耐热冻干保护剂仅能使活疫苗在2～8℃条件下保存24个月，37℃条件下保存30天。

发明内容

本发明的目的是提供一种耐热保护剂，能够增强活疫苗的耐热性能。

本发明还提供耐热保护剂在制备活疫苗冻干粉中的应用，采用该耐热保护剂制备的活疫苗冻干粉在37℃保存2个月，15℃条件下保存24个月。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种耐热保护剂，按照质量百分含量由下列物质组成： 

低聚糖40%～80%，

氨基酸3%～12%，

明胶3%～12%，

酪蛋白水解物3%～12%，

聚乙烯基吡咯烷酮3%～12%，

甘油3%～12%，

普鲁尼克-68 3%-12%。

所述低聚糖选自海藻糖、蔗糖、乳糖和菊糖中的一种或两种以上的混合物。

所述氨基酸选自精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和异亮氨酸中的一种或两种以上的混合物。 

一种所述耐热保护剂在制备活疫苗冻干粉中的应用。

用溶剂溶解耐热保护剂，得到保护剂溶液；将保护剂溶液与活病毒液混合，得到活疫苗；将活疫苗进行冷冻干燥即得活疫苗冻干粉。

所述溶剂为无菌的生理盐水、注射用水、PBS缓冲液、Tris-HCl缓冲液或Hank’s液，所述耐热保护剂与溶剂的质量比为3:6～8。

所述保护剂溶液与活病毒液按照质量比为1:0.5～2混合。

所述活病毒液为鸡新城疫病毒液或猪繁殖与呼吸综合征病毒液。

冷冻干燥的方法为：将活疫苗在常压、温度为-40℃～-65℃条件下保持2～6小时，在真空度为0.1～10.0mbar温度为-10℃～4℃条件下保持10～26小时，在真空度为0.01～5.0mbar温度为10℃～28℃条件下保持2～8小时。

本发明耐热保护剂，由于其成分及含量的合理搭配，使得活疫苗耐热、耐储存。耐热保护剂中的低聚糖能够置换毒囊膜或者细胞壁中的，让病毒处于休眠状态，降低病毒干燥和保存期的生命活动，进而大大加强其耐热性能。

采用本发明耐热保护剂制备的活疫苗冻干粉，避免了冰晶的形成，减少病毒囊膜或者细胞壁的物理损伤，使得活疫苗冻干粉在37℃保存2个月，15℃条件下保存24个月。

具体实施方式

下面通过实施例进一步解释本发明，但本发明并不受这些实施例的限制。

实施例1 耐热保护剂的制备

本实施例中如果无特殊说明，百分数均指重量百分含量。

其中，酪蛋白水解物购自ShanHai Richu Bioscience Co..Ltd，批号090901；聚乙烯基吡咯烷酮（K-30）购自国药集团化学试剂有限公司，批号F20111009；普鲁尼克68（Pluronic F 68）购自上海生工生物有限公司，批号HJ0522B2012。

耐热保护剂1配方：

海藻糖               68%，

甘氨酸               6%，

明胶                 3%，

酪蛋白水解物         6%，

聚乙烯基吡咯烷酮     6%，

甘油                 5%，

普鲁尼克68          6%。

耐热保护剂2配方：

海藻糖   38%，蔗糖   20%，

精氨酸、甘氨酸、蛋氨酸、谷氨酸和异亮氨酸     各2%，

明胶                 6%，

酪蛋白水解物         10%，

聚乙烯基吡咯烷酮     3%，

甘油                 3%，

普鲁尼克68          10%。

耐热保护剂3配方：

海藻糖、蔗糖、乳糖和菊糖      各15%，