[发明专利]一种枣树试管苗诱变多倍体筛选的新方法

权利要求书

1.一种枣树试管苗诱变多倍体筛选的新方法，其特征在于，包括以下步骤：

①木枣试管苗诱变的基本程序；

②根据形态学特征对诱变后的植株进行第一次筛选；

③分化培养对分化出的丛生芽进行第二次筛选；

④对筛选的目标丛生芽进行染色体分析；

⑤对确定的多倍体进行培养。

2.根据权利要求1所述的该方法，其特征在于，具体包括以下步骤：

⑴ 在木枣试管苗继代培养基中加入秋水仙碱溶液，灭菌冷却后，在超净工作台上将带茎尖枣树试管苗接种在培养基上，每瓶培养基可以接种5~7株试管苗；在光照1 500 lx±200 lx，每天给12 h的光照、湿度70%±5%、温度25±1℃条件下培养30d，完成诱变过程；

⑵ 将第一步中的诱变过程完成的枣树试管苗按每瓶一个芽体的方式转接到不含秋水仙碱的新培养基中；

⑶ 将低温培养结束后的枣树试管苗接种在以MS为基本培养基，pH =6.0、附加琼脂55g/L、蔗糖30g/L、6-A1.0mg/L、IBA0.2 mg/L、TDZ0.01 mg/L的培养基上进行连续分化培养；

⑷ 将第三步获得的丛生芽按叶片形态是否变皱褶、茎干是否变粗壮、叶间距是否变短对其进行筛选。筛选后的植株再按单芽体进行 培养；

⑸ 对经过再次培养的疑是多倍体进行染色体压片观察，确认其是否是多倍体。

3.根据权利要求1所述的该方法，其特征在于，在木枣试管苗继代培养基中加入30%的秋水仙碱溶液。

4.根据权利要求1所述的该方法，其特征在于， MS培养基为：NH₄NO₃ 1650mg/L；KNO₃　1 900 mg/L； CaCl₂·2H₂O 440 mg/L；MgSO ₄·7H₂O 370 mg/L；KH₂PO₄ 170 mg/L；KI 0.83 mg/L；H₃BO₃ 6.2 mg/L；MnSO₄·4H₂O 22.3 mg/L；ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg/L；Na₂MnO₄·2H₂O 0.25 mg/L；CuSO₄·5H₂O 0.025 mg/L；CoCl₂·6H₂O 0.025 mg/L；FeSO₄·7H₂O  27.8 mg/L；Na₂-EDTA·2H ₂O 37.3 mg/L；　　有机物质： 肌醇 100 mg/L；烟酸 0.5 mg/L；盐酸吡哆醇  0.5 mg/L；盐酸硫胺素 0.1 mg/L；甘氨酸 2.0 mg/L。

5.根据权利要求1所述的该方法，其特征在于， 将低温培养结束后的枣树试管苗接种在以MS为基本培养基，pH =6.0、附加琼脂55g/L、蔗糖30g/L、6-A1.0mg/L、IBA0.2 mg/L、TDZ0.01 mg/L的培养基上进行连续分化培养，培养条件：光照1 500 lx±200 lx，每天给12 h的光照、湿度70%±5%、温度25±1℃条件下培养；直到分化出不同形态的丛生芽。

6.根据权利要求1所述的该方法，其特征在于，所用来筛选多倍体的木枣芽体为诱变后的试管苗单个芽体分化出的新芽体。