[发明专利]一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法

权利要求书

1.一种检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，其特征在于：酶标板上包被了包被抗体JN2011-01，合适的浓度下最大限度捕获SEA；洗板3次，洗去未结合的包被抗体，加入封闭液200μL封闭板孔上多余结合位点；洗板3次，加入样品及对照，37℃孵育1h；洗板3次，加入酶标抗体JN2011-02-HRP，37℃孵育1h；洗板4次，加入显色液显色12min；

样品中SEA浓度≥0.5ng/mL，样品中SEA被包被抗体JN2011-01捕获并与酶标抗体JN2011-02-HRP结合，并催化底物在450nm产生吸收值，被判定为阳性；

样品中SEA浓度＜0.5ng/mL，样品中SEA不被包被抗体JN2011-01捕获或者捕获数量太小不足以引起足够的信号，被判定为阴性。

2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌肠毒素A的双抗体夹心法，其特征在于：测定步骤为：

a、包被：用6μg/mL的JN2011-01包被酶标板，100μL /孔，4℃过夜；

b、洗涤：用PBST洗涤反应板三次，每次3min，200μL / 孔，然后甩干反应板，所述PBST为含0.05%吐温-20的PBS；

c、封闭：含0.2%明胶的0.01M，pH9.6 CBS，200μL /孔，37℃封闭2h；

d、洗涤：同b；

e、样品：用样品稀释液0.01M，pH7.2 PBS将SEA母液稀释成0.125，0.25，0.5，1，2，4，8ng/mL系列浓度，另设一个PBS空白对照，酶标板1-7列每孔加入100μL系列浓度样品，第8列加入空白对照，于37℃孵育1h；

f、洗涤：同b；

g、加酶标抗体JN2011-02-HRP，用含有0.1%明胶和0.05%吐温-20的PBS的抗体稀释液稀释至4μg/mL，100μL /孔，37 C孵育1h；

h、洗涤：同b；

i、显色：加显色液 100μL /孔，显色15min；

显色液应在使用前，按照显色液A:显色液B体积比=5:1的比例配置使用；

显色液A：0.933 g柠檬酸，3.68 g Na₂HPO₄·12H₂O，18 μL 30%H₂O₂，100mL水

显色液B：60 mg四甲基联苯胺TMB溶于100 mL乙二醇；

j、终止：加2 mol/L硫酸终止液，50μL /孔；

k、测定：用酶标仪检测OD₄₅₀nm，绘制SEA双抗体夹心法的标准曲线，样品测定时从该标准曲线上OD₄₅₀nm值对应求得样品中SEA含量。