[发明专利]一种龙胆泻肝颗粒的检测方法

权利要求书

1.一种龙胆泻肝颗粒的检测方法，包括栀子的鉴别方法：

取本品龙胆泻肝颗粒12g，加水30ml，加热使溶解，放冷，用乙醚提取3次，每次15ml，弃去乙醚液，再用水饱合的正丁醇提取3次，每次15ml，合并正丁醇液，加等体积氨试液，摇匀，放置分层，分取上清液，减压回收正丁醇至干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液；另取栀子苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：丙酮：甲酸：水=5：5：1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以硫酸乙醇溶液，在110℃烘10分钟，至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

其特征在于还包括如下的鉴别方法和含量测定方法和检查方法：

（一）鉴别方法

（1）取本品龙胆泻肝颗粒12g，研细，加甲醇50ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加水15ml，加热使溶解，放冷，用水饱合正丁醇提取2次，每次15ml，合并正丁醇提取液，减压回收正丁醇至干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯：丁酮：甲酸：水=5：3：1.1：1为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铁乙醇溶液；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（2）取上述（1）项下的供试品溶液，作为供试品溶液；另取甘草对照药材2g，加甲醇20ml，加热回流30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，作为对照药材溶液；照中国药典2005年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各2μl，分别点于同一用1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯：甲酸：冰醋酸：水=15：1：1：2为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（3）取上述（1）项下的供试品溶液，加于已处理好的中性氧化铝柱上，所装中性氧化铝120目，2g，柱内径15mm，用甲醇20ml洗脱，洗脱液浓缩至2ml，作为供试品溶液；另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2005年版一部附录VI B薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各3μl，分别点于同一硅胶GF₂₅₄薄层板上，以氯仿：甲醇：水=13：6：2，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外光灯下检识；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；

（二）含量测定方法

（1）对照品溶液的制备：精密称取在60℃减压干燥4小时的黄芩苷对照品适量，加甲醇制成每1ml含60μl的溶液，即得；

供试品溶液制备：取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒，充分研细，取1.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加60%甲醇45ml，超声处理， 30分钟，功率150W，频率25KHz，放冷至室温，加60%甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得；

照中国药典2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇：水：磷酸=47：53：0.2为流动相；检测波长为280nm；理论板数按黄芩苷峰计算，应不低于2500；

测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入液相色谱液，测定，即得；

（三）检查方法：

照中国药典2005年版一部附录Ⅵ D高效液相色谱法测定；

色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基键合硅胶为填充剂；甲醇：水：冰醋酸=57：43：1为流动相；检测波长为317nm，理论塔板数按马兜铃酸A峰计算应不低于8000；

对照品溶液的制备：精密称取马兜铃酸A对照品5mg，置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，精密吸取0.5ml，置100ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，每1ml含马兜铃酸A为1μg；

    供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品龙胆泻肝颗粒，混匀，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇：甲酸=98:2，50ml，称定重量，超声处理30分钟，功率250W，频率40kHz，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液10ml，蒸干，残渣加水20ml使溶解，用10％的盐酸溶液调pH值2－3，用乙醚提取4次，每次10ml，合并乙醚提取液，置60℃水浴上挥干，残渣加少量甲醇溶解并转移至10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得;

测定法: 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。