[发明专利]丹酚酸B作为儿茶酚-O-甲基转移酶抑制剂在帕金森病治疗中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及天然药物领域，具体涉及丹酚酸B作为儿茶酚-O-甲基转移酶抑制剂在帕金森病治疗中的应用。

背景技术

儿茶酚-O-甲基转移酶(Catechol-O-methyltransferase，COMT)是生物体内一种重要的II相代谢酶，参与将含有儿茶酚结构的物质进行0-甲基化代谢。其底物有内源性物质如肾上腺素、去甲肾上腺素等儿茶酚胺类神经递质和外源性物质(药物)如茶多酚、左旋多巴等。因此，调节COMT的功能可能会影响这些物质在生物体内的代谢过程，从而产生一系列生理、药理效应。。

帕金森病是一种慢性神经退行性疾病，患者脑内黑质纹状体中多巴胺减少，出现肌肉震颤、强直等一系列症状。目前对于帕金森病尚没有根治方法，只能通过服用药物来减缓症状。临床上常用的L-DOPA是多巴胺的前体药物，可以透过血脑屏障脱羧产生多巴胺进入脑内从而达到治疗效果。由于L-DOPA在外周被大量代谢(脱羧)导致其入脑量不到给药量的10％，临床上采用都是外周脱羧酶抑制剂如卡比多巴(Carbidopa)或苄丝肼与L-DOPA联合用药以达到增加其中枢浓度的作用。然而，即使在L-DOPA与Carbidopa合用后，仍然只有不到10％的L-DOPA可以入脑，原因是L-DOPA在外周的脱羧反应被抑制后，大约有90％的L-DOPA被COMT代谢生成3-氧甲基左旋多巴(3-OMD)。因此，将L-DOPA与脱羧酶抑制剂及COMT抑制剂(如托卡朋，恩他卡朋)合用是目前临床上的建议用法。然而，托卡朋有很强的肝毒性，恩他卡朋的毒性虽小但效应不够理想，二者在临床上的应用都受到各种限制，所以需要寻找新的低毒、有效的COMT抑制剂以改善左旋多巴(L-DOPA)对帕金森病的治疗效果。

丹酚酸B(SAB)为中药丹参的中最主要的水溶性成分之一，具有抗氧化、抗血小板聚集以及抗癌等多种效应。其结构式为：

SAB的临床前药代动力学的研究表明，SAB在体内快速被代谢为甲基化代谢产物并通过胆汁排泄，提示COMT在SAB的代谢中发挥了重要的作用。我们的早期研究也发现在甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(SAM)的存在下，通过体外温孵，SAB会被代谢生成甲基化代谢产物，而且有明显的底物抑制现象。因此，我们推测SAB可能会有效的抑制COMT其它底物如L-DOPA的代谢。

发明内容

本发明的目的是提供SAB的一种新的医药用途，即可通过抑制COMT介导的L-DOPA的甲基化代谢从而改善L-DOPA治疗帕金森病的效果。首先我们制备了大鼠的肝胞浆COMT，优化了L-DOPA的体外温孵条件以保证代谢物3-OMD的生成与温孵时间和酶浓度呈线性。通过时间依赖性曲线发现3-OMD的线性时间范围为10-45min，同理通过酶浓度依赖曲线可以得出线性酶浓度范围为0.2-1mg/ml，所以最终选取酶浓度为0.5mg/ml，温孵时间为30min。然后考察了L-DOPA的体外甲基化代谢情况，得到酶动力学曲线，符合经典的酶动力学，Km值为16μM，在温孵体系中加入了一系列浓度的SAB后，发现SAB可以浓度依赖的抑制L-DOPA的甲基化代谢，IC50为1.84μM。对于体内研究，同时给予SD大鼠L-DOPA/Carbidopa和SAB后，与单独给予L-DOPA/Caibidopa相比，血浆和纹状体中的3-OMD的浓度都明显下降(p＜0.05)，说明丹酚酸B的确可以抑制L-DOPA在体内的甲基化代谢。

附图说明

图1：A，L-DOPA体外温孵的时间依赖性曲线；B，L-DOPA体外温孵的酶浓度依赖性曲线。

图2：L-DOPA的酶动力学曲线。

图3：SAB对L-DOPA体外甲基化代谢的抑制曲线。

图4：SAB对L-DOPA体内甲基化代谢的抑制作用。A，SAB对血浆中3-OMD浓度的影响；B，SAB对脑部纹状体部位的3-OMD浓度的影响。

具体实施方式

实施例1.大鼠肝胞浆COMT酶的制备

实验材料：SD大鼠，SPF级别，购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司。