[发明专利]用于输送生物活性RNA的组合物和方法

权利要求书

1.包含第一聚核苷酸和第二聚核苷酸的表达载体，其中

所述第一聚核苷酸编码

第一生物活性RNA序列；

识别RNA序列；

和组成型转运元件(CTE)；且

所述第二聚核苷酸编码多肽，所述多肽包含

RNA结合域序列，和

(a)细胞穿透肽序列或(b)真核非经典分泌域序列中至少一个。

2.所述权利要求1中的表达载体，其中所述第一聚核苷酸和第二聚核苷酸中至少一个与可诱导启动子序列可操作性地连接。

3.如权利要求1所述的表达载体，其中所述第一聚核苷酸还编码第二生物活性RNA序列。

4.如权利要求3所述的表达载体，其中所述第一生物活性RNA序列或第二生物活性RNA序列中至少有一个是适体。

5.如权利要求3所述的表达载体，其中所述第一生物活性RNA序列或第二生物活性RNA序列中至少一个调节靶基因产物的基因表达或基因活性。

6.包含第一聚核苷酸和第二聚核苷酸的表达载体，其中

所述第一聚核苷酸编码

第一生物活性RNA序列，和识别RNA序列,

所述第二聚核苷酸编码多肽，所述多肽包含：

RNA结合域序列，和(a)细胞穿透肽序列或(b)真核非经典分泌域序列中至少一个，和

编码辅助蛋白的第三聚核苷酸，所述辅助蛋白促进RNA-多肽复合物从细胞中的分泌，所述RNA-多肽复合物包含生物活性RNA序列、识别序列和多肽。

7.如权利要求6所述的表达载体，其中所述第一聚核苷酸与第一启动子序列可操作性地连接，以及其中第二聚核苷酸和第三聚核苷酸中的至少一个与第二启动子序列可操作性地连接。

8.如权利要求7所述的表达载体，其中所述第一启动子序列和第二启动子序列中至少有一个是可诱导启动子序列。

9.如权利要求6所述的表达载体，其中所述第一聚核苷酸还编码组成型转运元件。

10.如权利要求6所述的表达载体，其中所述辅助蛋白是膜结合蛋白或细胞溶质蛋白。

11.包含第一聚核苷酸和第二聚核苷酸的表达载体，其中

所述第一聚核苷酸编码

第一生物活性RNA序列，

识别RNA序列；以及

所述第二聚核苷酸编码多肽，所述多肽包含：

RNA结合域序列，和(a)细胞穿透肽序列或(b)真核非经典分泌域序列中至少一个，

其中所述第一聚核苷酸和第二聚合苷酸中至少有一个与可诱导启动子序列可操作性地连接。

12.如权利要求6所述的表达载体，其中所述第一聚核苷酸还编码组成型转运元件。

13.包含如权利要求1所述的表达载体的细胞，其中所述表达载体稳定地融入生物反应器细胞的细胞DNA。

14.包含如权利要求6所述的表达载体的细胞，其中所述载体稳定地融入生物反应器细胞的细胞DNA。

15.包含如权利要求11所述的表达载体的细胞，其中所述载体稳定地融入生物反应器细胞的细胞DNA。

16.从细胞中分泌生物活性RNA的方法，所述方法包括将如权利要求1所述的表达载体施用于所述细胞。

17.从细胞中分泌生物活性RNA的方法，所述方法包括将如权利要求6所述的表达载体施用于所述细胞。

18.从细胞中分泌生物活性RNA的方法，所述方法包括将如权利要求11所述的表达载体施用于所述细胞。

19.调节一种或多种靶基因在靶细胞中表达的方法，所述方法包括将如权利要求1所述的表达载体施用于位于胞外间隙的第二细胞以制造分泌生物活性RNA的生物反应器细胞，其中所述胞外间隙包含靶细胞，其中所述生物活性RNA调节一种或多种靶基因在靶细胞中的表达。

20.调节一种或多种靶基因在靶细胞中表达的方法，所述方法包括将如权利要求6所述的表达载体施用于位于胞外间隙的第二细胞以制造分泌生物活性RNA的生物反应器细胞，其中所述胞外间隙包含靶细胞，其中所述生物活性RNA调节一种或多种靶基因在靶细胞中的表达。