[发明专利]使用具有降低的ISPA活性的宿主细胞提高异戊二烯的产量

权利要求书

1.一种能够产生异戊二烯的重组细胞，其中所述细胞包含具有降低的功能活性的ispA基因和一种或多种编码如下多肽的核酸：

(a)异戊二烯合酶多肽，其中所述异戊二烯合酶多肽由异源核酸编码；和

(b)一种或多种甲羟戊酸(MVA)途径多肽，

其中在合适的培养基中培养所述重组细胞提供所述多肽的产生以及异戊二烯的合成。

2.根据权利要求1所述的重组细胞，其中所述ispA基因的功能活性通过如下来降低：

a.缺失所述ispA基因；

b.降低ispA基因表达；

c.降低ispA蛋白活性；

d.降低ispA蛋白表达；或者

e.时序调节ispA表达。

3.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA基因表达通过将所述ispA基因设置在弱启动子的控制下来降低。

4.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA基因表达通过将所述ispA基因设置在自动调节启动子的控制下来降低。

5.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA蛋白活性通过所述ispA蛋白与蛋白水解标签的翻译融合来降低。

6.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA蛋白活性通过使用反义RNA来降低。

7.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA蛋白活性通过将一个或多个突变引入位于ispA mRNA分子中的核糖体结合位点中来降低。

8.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA基因表达通过HrcA转录阻遏蛋白来降低。

9.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA蛋白活性通过将内源ispA基因替换为编码这样的多肽的基因来降低，所述多肽包含的针对DMAPP的Km与由内源ispA基因编码的多肽的Km相比是增加的。

10.根据权利要求2所述的重组细胞，其中ispA蛋白活性通过将内源ispA基因替换为包含不同最适温度的另一基因来降低。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的重组细胞，其中所述异戊二烯合酶多肽是植物异戊二烯合酶多肽或其变体。

12.根据权利要求11所述的重组细胞，其中所述异戊二烯合酶多肽是来自葛属(Pueraria)或杨属(Populus)或杂种银白杨(Populus alba)×欧洲山杨(Populus tremula)的多肽或其变体。

13.根据权利要求12所述的重组细胞，其中所述异戊二烯合酶多肽选自山葛(Pueraria montana)或野葛(Pueraria lobata)、美洲山杨(Populus tremuloides)、银白杨、黑杨(Populus nigra)、毛果杨(Populus trichocarpa)或其变体。

14.根据权利要求11所述的重组细胞，其中所述植物异戊二烯合酶多肽是葛异戊二烯合酶多肽或其变体。

15.根据权利要求11所述的重组细胞，其中所述植物异戊二烯合酶多肽是桉树(Eucalyptus)异戊二烯合酶多肽或其变体。

16.根据权利要求1-15中任一项所述的重组细胞，其中编码(b)的一种或多种MVA途径多肽的所述一种或多种核酸为异源核酸。

17.根据权利要求16所述的重组细胞，其中所述细胞包含一种或多种编码来自MVA上游途径的MVA途径多肽的核酸，其中所述MVA上游途径核酸选自AA-辅酶A硫解酶核酸或乙酰乙酰辅酶A合酶核酸、HMG-辅酶A合酶核酸和HMG-辅酶A还原酶核酸。

18.根据权利要求16所述的重组细胞，其中所述细胞包含一种或多种编码来自MVA下游途径的MVA途径多肽的核酸，其中所述MVA下游途径核酸选自MVK核酸、PMK核酸和MVD核酸。

19.根据权利要求16所述的重组细胞，其中所述细胞包含一种或多种编码完整MVA途径的MVA途径多肽的核酸。

20.根据权利要求1所述的细胞，所述细胞进一步包含一种或多种编码异戊烯二磷酸δ-异构酶(IDI)多肽的核酸。