[发明专利]脊髓灰质炎病毒株的鉴定

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学和病毒疫苗学领域。具体地，本发明涉及用于鉴定疫苗专用脊髓灰质炎病毒株的工具和方法。

背景技术

活的减毒的口服脊髓灰质炎疫苗(OPV)和灭活的脊髓灰质炎病毒疫苗(IPV)的使用已经显著地减少了脊髓灰质炎的病例数目和脊髓灰质炎的爆发(Dutta，2008；Crawford and Buttery，2010)。世界卫生组织(WHO)的全球根除脊髓灰质炎行动(Global Polio Eradication Initiative)目前将注意力集中在消灭疾病和根除野生脊髓灰质炎病毒上(WHO，2003；Sutter et al.，2003)。尽管在普及性疫苗接种方面付出了很大努力，但是在最近几年中仍然报道了几十例脊髓灰质炎病例(Crawford and Buttery，2010；Global Polio Eradication Initiative.Global polio case count.2011.可获自：(Nov14，2011取得的)；Kew et al.，2005)。用OPV接种疫苗可引入疫苗衍生脊髓灰质炎病毒，导致脊髓灰质炎的爆发(Kew et al.，2005)。这些疫苗衍生脊髓灰质炎病毒中有一些有高毒力并且是可传染的(Boot et al.，2004；Kew et al.，2005)。显然，IPV不会有这个缺点。然而，目前IPV的生产能力非常有限，IPV使用的增加要求建立更多的生产设备。这些设备必须应对密闭性方面严苛的安排，因为IPV是使用有毒力的脊髓灰质炎毒株生产的(2003)。因此，WHO决定促进开发基于减毒的脊髓灰质炎病毒(例如Sabin毒株)的IPV(Heymann et al.，2005；Heymann et al.，2006)。因此，即使不能完全消除从生产设备逃逸的病毒造成有害影响或意外感染制造人员的风险，但是可使上述风险降到最低(Kew et al.，2005)。

在基于野生型毒株的IPV向基于Sabin毒株的IPV转变的过程中，IPV的生产者可能既使用野生型脊髓灰质炎病毒株也使用减毒的脊髓灰质炎病毒株(表1)。明确地鉴定用于IPV生产的脊髓灰质炎病毒株对于疫苗发放而言是重要的质量控制试验。目前，血清学方法用于鉴定和定量化IPV中存在的三种脊髓灰质炎病毒血清型，但是其通常不能区分野生型疫苗毒株和减毒的疫苗毒株(Westdijk et al.，2011)。尽管可以使用能够区分野生型脊髓灰质炎病毒株和减毒的脊髓灰质炎病毒株的血清学测定，但是所述血清学测定需要高度特异性的抗血清(van der Avoort et al.，1995)，所述高度特异性的抗血清的制备是复杂并且费时费力的(van Wezel and Hazendonk，1979)。或者可鉴定野生型或减毒的脊髓灰质炎病毒株的分子生物学方法可用于常规分析野生(field)分离株中的脊髓灰质炎病毒。所述技术基于核酸杂交(Kilpatrick et al.，1996)或逆转录PCR(Kilpatrick et al.，1998；Boot et al.，2004；Kilpatrick et al.，2004；Kilpatrick et al.，2009)。每种技术都有其自身的优点和缺点(表2)。然而，必须将文献中描述的这些方法改变后，才可将其用于鉴定疫苗专用的脊髓灰质炎病毒株。因此，本领域仍然需要使得能够快速且准确地鉴定和区分疫苗生产中使用的多种疫苗专用脊髓灰质炎病毒株的方法和工具，所述脊髓灰质炎病毒株包括例如Mahoney、MEF-1、Saukett H、Sabin1型、Sabin2型和Sabin3型。

发明内容