[发明专利]改进使用土壤杆菌属转化的方法

说明书

相关申请的交叉引用

本申请要求2011年12月15日提交的美国临时专利申请系列号61/576,138的权益。

发明背景

植物转化通常涵盖将植物可表达的外源基因引入植物细胞，从而可以获得稳定维持并表达该外源基因的能育的后代植物所需要并加以利用的方法学。已经转化了单子叶植物和双子叶植物类别的众多成员。转基因的农作物以及水果和蔬菜具有产业价值。这类作物包括但不限于：玉米、稻、大豆、芸苔、向日葵、苜蓿、高粱、小麦、棉花、花生、番茄、马铃薯等。

已知数项用于将外源遗传物质引入植物细胞，并用于获得稳定维持和表达该引入基因的植物的技术。这类技术包括加速包覆于微粒上的遗传物质直接进入细胞(例如美国专利号4,945,050和美国专利号5,141,131)。其他转化技术包括WHISKERS^TM技术。参见，例如，美国专利号5,302,523和美国专利号5,464,765。电穿孔技术也已用于转化植物。参见，例如WO87/06614、美国专利号5,472,869、美国专利号5,384,253、WO92/09696和WO93/21335。另外，可以采用植物原生质体与含有待递送的DNA的脂质体的融合、DNA的直接注射、以及其他可能的方法。

插入的DNA一旦整合到植物基因组中，其在全部后续世代中通常是相对稳定的。转化细胞在植物内以通常方式生长。它们可以形成生殖细胞并将转化的一个或多个性状传递给后代植物。可以以正常的方式种植这类植物，并且可以将其与具有相同的转化遗传因子或其他遗传因子的植物杂交。所得杂交个体具有相应的表型特性，例如，能够控制植物害虫进食的能力。

还可以使用多种可选的技术将DNA插入到宿主植物细胞中。那些技术包括但不限于，使用由根瘤土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)或发根土壤杆菌(Agrobacterium rhizogenes)递送的T-DNA作为转化剂来进行转化。可以使用土壤杆菌技术来转化植物，如记载于例如美国专利号5,177,010、美国专利号5,104,310、欧洲专利申请号0131624B1、欧洲专利申请号120516、欧洲专利申请号159418B1、欧洲专利申请号176112、美国专利号5,149,645、美国专利号5,469,976、美国专利号5,464,763、美国专利号4,940,838、美国专利号4,693,976、欧洲专利申请号116718、欧洲专利申请号290799、欧洲专利申请号320500、欧洲专利申请号604662、欧洲专利申请号627752、欧洲专利申请号0267159、欧洲专利申请号0292435、美国专利号5,231,019、美国专利号5,463,174、美国专利号4,762,785、美国专利号5,004,863、和美国专利号5,159,135。已经深入研究了含有T-DNA的载体用于转化植物细胞的用途，并充分记载于欧洲专利申请120516；An et al.,(1985,EMBO J.4:277-284)；Fraley et al.,(1986,Crit.Rev.Plant Sci.4:1-46)，以及Lee和Gelvin(2008,Plant Physiol.146:325-332)中，在本领域中已经确立。