[发明专利]使用针对T/B细胞耗尽的特异性方案的用于稳定和长期植入的联合疗法

权利要求书

1.治疗需要非同基因的细胞或组织移植物的受试者的方法，所述方法包括：

(a)将一定剂量的T细胞被耗尽的未成熟造血细胞移植到受试者中，其中所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞包含每千克该受试者的体重小于5×10⁵个CD3⁺T细胞，并且其中所述剂量包含每千克该受试者的体重至少约5×10⁶个CD34+细胞，并且其中所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞通过将所述T细胞与所述未成熟造血细胞分离而获得，该分离通过一种方法，其包括：

(i)将抗体添加至与表面标记特异性结合的未成熟造血细胞，其中用磁性敏感剂标记所述抗体；

(ii)通过磁场将与标记有所述磁性敏感剂的所述抗体特异性结合的所述未成熟造血细胞固定在基体中；

(iii)洗涤所述基体以移除未结合的细胞；和

(iv)移除所述磁场以从所述基体洗脱经结合的细胞；

并且随后

(b)给该受试者施用治疗有效量的环磷酰胺，其中所述治疗有效量包含每千克体重25-200mg，由此治疗该受试者。

2.权利要求1的方法，还包括在步骤(a)之前在降低强度预处理下预处理该受试者。

3.权利要求1的方法，还包括在步骤(a)之前采用体内T细胞减灭预处理该受试者。

4.权利要求1的方法，其中一定剂量的所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞包含每千克该受试者的体重5-40×10⁶个CD34+细胞。

5.权利要求4的方法，其中一定剂量的所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞包含每千克该受试者的体重至少约10×10⁶个CD34+细胞。

6.权利要求1的方法，其中所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞选自由T细胞被耗尽的骨髓细胞、T细胞被耗尽的G-CSF流动的外周血祖细胞、T细胞被耗尽的脐带血、通过从骨髓和/或从G-CSF流动的外周血祖细胞的阳性选择获得的纯化CD34+细胞、和体外扩增的CD34⁺细胞所组成的组。

7.权利要求1的方法，其中所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞包含每千克该受试者的体重小于1×10⁶个CD8⁺TCRα/β^-细胞。

8.权利要求1的方法，其中通过MACS^TM来获得所述T细胞被耗尽的未成熟造血细胞。

9.权利要求1的方法，其中当所述表面标记是T细胞表面标记时，所述未结合的细胞包含T细胞被耗尽的未成熟造血细胞。

10.权利要求9的方法，其中所述T细胞表面标记选自CD2、CD3、CD4、CD8和TCRα/β。

11.权利要求1的方法，其中当所述表面标记是未成熟造血细胞表面标记时，所述经结合的细胞包含T细胞被耗尽的造血细胞。

12.权利要求11的方法，其中所述造血细胞表面标记选自由CD34、CD33和CD131所组成的组。

13.权利要求1的方法，还包括使用与B细胞表面标记特异性结合的抗体将B细胞与所述T细胞被耗尽的未成熟细胞分离。

14.权利要求13的方法，其中所述B细胞表面标记选自由CD19和CD20所组成的组。

15.权利要求1的方法，其中所述基体为铁磁性基体。

16.权利要求1的方法，其中所述基体包含磁性灵敏的材料或铁磁性材料的球。

17.权利要求1的方法，其中所述磁性敏感剂包含超顺磁性颗粒。

18.权利要求17的方法，其中所述超顺磁性颗粒与所述抗体接合，其中所述抗体与抗免疫球蛋白、抗生物素蛋白和或抗-半抗原-特异性微珠组合。

19.权利要求1或17的方法，其中使用高梯度磁性分离(HGMS)来实施所述的将所述T细胞与所述未成熟造血细胞分离。

20.权利要求1的方法，其中使用分离柱来实施所述的将所述T细胞与所述未成熟细胞分离。