[发明专利]与靶蛋白质结合的核酸片段

权利要求书

1.一种可转录或可复制的核酸适体，所述核酸适体包含

天然核苷酸和

具有人工碱基可配对的人工碱基的非天然核苷酸。

2.根据权利要求1所述的核酸适体，其中所述人工碱基选自由以下构成的组：7-(2-噻吩基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基、2-硝基吡咯-1-基、和2-甲酰基-1H-吡咯-1-基。

3.根据权利要求2所述的核酸适体，其中所述人工碱基包括所述人工碱基的人工碱基可配对衍生物。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的核酸适体，其中所述非天然核苷酸的含量为核苷酸总数的20％或更少。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的核酸适体，其中所述核酸是DNA或RNA。

6.根据权利要求1所述的核酸适体，其中所述核酸适体针对血管内皮生长因子作为靶物质。

7.根据权利要求6所述的核酸适体，其中所述核酸适体包括选自由以下构成的组的任何一个核苷酸序列：SEQ ID NO：25至73、80至104、106至109、111、和155至166(只要序列中的“n”表示7-(2-噻吩基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)、175、177、179、181、183、198、201、202、205至209、211、212、和229至278。

8.根据权利要求7所述的核酸适体，其中所述核酸适体由5'侧翼为SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列且3'侧翼为SEQ ID NO:2表示的核苷酸序列的根据权利要求7所述的任何一个核苷酸序列组成。

9.根据权利要求1所述的核酸适体，其中所述核酸适体针对干扰素γ作为靶物质。

10.根据权利要求9所述的核酸适体，其中所述核酸适体包括选自由以下构成的组的任何一个核苷酸序列：SEQ ID NO：167至174(只要序列中的“n”表示7-(2-噻吩基)-3H-咪唑并[4,5-b]吡啶-3-基)、186、188、190、192、194、214至222、和279至328。

11.根据权利要求10所述的核酸适体，其中所述核酸适体由5'侧翼为SEQ ID NO:1表示的核苷酸序列且3'侧翼为SEQ ID NO:2表示的核苷酸序列的根据权利要求10所述的任何一个核苷酸序列组成。

12.一种单链核酸文库，所述单链核酸文库包括可转录或可复制的、含有非天然核苷酸的单链核酸分子，所述含有非天然核苷酸的单链核酸分子包括

天然核苷酸和

具有人工碱基可配对的人工碱基的非天然核苷酸。

13.根据权利要求12所述的单链核酸文库，其中所述非天然核苷酸在所述含有非天然核苷酸的单链核酸分子中的含量为核苷酸总数的20％或更少。

14.根据权利要求12或13所述的单链核酸文库，其中所述单链核酸分子包括5'-末端和3'-末端的引物结合区、以及位于所述引物结合区之间的中心区，所述引物结合区各自由所述文库中共有的已知核苷酸序列组成。

15.根据权利要求14所述的单链核酸文库，其中所述文库包括含有非天然核苷酸的单链核酸分子，所述含有非天然核苷酸的单链核酸分子还包括与设置在所述中心区的核苷酸序列的特定位置处的一个或多个人工碱基的位置信息相关的识别位点，所述识别位点设置在所述中心区的至少一端以便在所述引物结合区的侧翼并且由天然核苷酸构成。

16.一种用于制备核酸适体的方法，所述方法包括：

将根据权利要求12至15中的任一项所述的单链核酸文库与靶物质在溶液中混合以形成单链核酸分子与所述靶物质的复合物的复合物形成步骤；

回收所述复合物的复合物回收步骤；

从所回收的复合物中回收所述单链核酸分子的单链核酸分子回收步骤；

通过核酸扩增方法扩增所回收的单链核酸分子的扩增步骤；以及

从通过所述扩增步骤获得的核酸分子制备核酸适体的核酸适体制备步骤。

17.根据权利要求16所述的方法，还包括使用所述核酸适体制备步骤中制备的核酸适体的新的单链核酸文库，将从所述复合物形成步骤至所述核酸适体制备步骤的新的轮重复一次或多次的重复步骤。