[发明专利]筛选植物的在植物中诱导孤雌生殖的遗传元件的方法

权利要求书

1.一种用于生成缺少由具有繁殖能力的有性方式获得的胚的大型种子群体的方法，包括：

a)用包含三个部分的第一转基因盒转化第一植物，所述三个部分为：

i)表达驱动同源解毒剂的启动子的卵细胞，

ii)花粉消融PTU

iii)种子选择标记；

b)用第二表达盒转化所述植物，其中所述第二表达盒包含编码通过卵细胞特异性启动子表达的毒素基因的核酸分子，生成显性半合子无胚表型，从而产生对于所述毒素而言是纯合的但对于能育性而言是半合子的植物群体；以及

c)使来自用所述第二盒转化的所述植物的所述种子生长，产生其种子的50％存活并且所述第一和第二表达盒为转基因的植物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一表达盒包含编码同源解毒剂的核酸分子，其中所述解毒剂选自：SEQ ID NO：49或其活性变体或片段。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述第一表达盒包含编码含有荧光团的种子颜色标记的核酸分子，所述荧光团选自：DS-RED、ZS-GREEN、ZS-YELLOW、AC-GFP、AM-CYAN和AM-CYAN1、AC-GFP、eGFP、eCFP、eYFP、eBFP、“水果”荧光蛋白(UC系统)；tagRFP、tagBFP、mKate、mKate2、tagYFP、tagCFP、tagGFP、TurboGFP2、TurboYFP、TurboRFP、TurboFP602、TurboFP635、TurboFP650、NirFP或Cerulean。

4.根据权利要求3所述的方法，其中所述第一表达盒包含花粉消融植物转录单元(PTU)，其具有的启动子选自包含下列的组：SEQ ID NO：53、54、55和56。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中所述第一表达盒还包含可操作地连接到编码同源解毒剂多肽的所述核酸分子的组织特异性启动子。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述组织特异性启动子是卵细胞组织特异性启动子。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述卵细胞组织特异性启动子选自包含下列的组：SEQ ID NO：1-9、11、13、15、17、19-21、31和33。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述第二盒还包含可操作地连接到毒素基因的卵细胞组织特异性启动子。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述第二盒启动子选自：SEQ ID NO：53、54、55和56。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述植物用孤雌生殖PTU转化，并且移除所述毒素和/或解毒剂互补构建体，以允许产生自繁殖植物。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述植物是双子叶植物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述双子叶植物为芸苔属物种(Brassica sp.)、向日葵、棉花、低芥酸油菜(canola)、红花、烟草、拟南芥(Arabidopsis sp.)或苜蓿。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述自繁殖植物是大豆。

14.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述自繁殖植物是单子叶植物。

15.根据权利要求14所述的方法，其中所述单子叶植物是玉蜀黍、小麦、水稻、大麦、高粱或裸麦。

16.一种通过权利要求1-15中任一项所述的方法产生的自繁殖植物。

17.一种权利要求16所述的自繁殖植物的种子。