[发明专利]一种用于糖蛋白合成的基于原核生物的无细胞系统

说明书

本申请要求2011年11月4日提交的美国临时专利申请系列号61/555,854的优先权，其通过引用整体并入本申请。

发明领域

本发明涉及用于生产糖基化蛋白或肽的无细胞系统、试剂盒和方法。

发明背景

无细胞蛋白合成系统正在逐渐成为有吸引力的替代依靠活细胞的常规表达系统的方案(Katzen等，“The Past,Present and Future of Cell-Free Protein Synthesis,”Trends Biotechnol.23:150-156(2005))。这是因为，在过去的十年中，无细胞蛋白合成反应：(i)能够在不到一天的时间内完成；(ii)使用的试剂成本降低；(iii)通过常规形成二硫键折叠复杂的蛋白；以及(iv)能够扩展至100L。两种主要方法已被用于体外转录/翻译：一种是基于无细胞提取物(CEF)，其通常来源于大肠杆菌、家兔网状细胞或小麦胚芽，另一种是基于纯化组分的重构的蛋白合成(Shimizu等，“Cell-Free Translation Reconstituted With Purified Components,”Nat.Biotechnol.19:751-755(2001))。由于其有能力在单一的集成平台上共同活化多种生化网络(Jewett等，“An Integrated Cell-Free Metabolic Platform for Protein Production and Synthetic Biology,”Mol.Syst.Biol.4:220(2008))，因而无细胞系统越来越多地用于多种重要的生物技术和合成生物学应用中(Ryabova等，“Functional Antibody Production Using Cell-Free Translation:Effects of Protein Disulfide Isomerase and Chaperones,”Nat.Biotechnol.15:79-84(1997)；Noireaux等，“Principles of Cell-Free Genetic Circuit Assembly,”Proc.Nat’l.Acad.Sci.U.S.A.100:12672-12677(2003)；Yang等，“Rapid Expression of Vaccine Proteins for B-Cell Lymphoma in a Cell-Free System,”Biotechnol.Bioeng.89:503-511(2005))。