[发明专利]低密度脂蛋白相关蛋白6(LRP6)-半寿期延长物构建体

权利要求书

1.一种分离的低密度脂蛋白相关蛋白6(LRP6)构建体，包含与LRP6结合的第一和第二LRP6单链Fv分子(scFv)和人血清白蛋白，其中第一和第二scFv分子与人血清白蛋白的N末端和C末端连接，其中LRP6构建体抑制经典的Wnt信号转导途径，并且其中LRP6构建体在LRP6结合蛋白存在的情况下显示不显著增强Wnt信号。

2.根据权利要求1所述的分离构建体，其中第一LRP6 scFv与人血清白蛋白的N末端连接并且与LRP6的螺旋桨1区结合，并且第二LRP6scFv与人血清白蛋白的C末端连接并且与LRP6的螺旋桨3区结合。

3.根据权利要求1所述的分离构建体，其中第一LRP6 scFv与人血清白蛋白的C末端连接并且与LRP6的螺旋桨1区结合，并且第二LRP6scFv与人血清白蛋白的N末端连接并且与LRP6的螺旋桨3区结合。

4.根据权利要求1所述的分离构建体，其中LRP6结合蛋白是选自Wnt1、Wnt3和Wnt3a的Wnt结合蛋白。

5.根据权利要求1所述的分离构建体，其中第一和第二LRP6 scFv借助选自Fc接头、铰合部接头、Gly-Ser接头、Ala接头和KTHT接头的接合接头间接地与人血清白蛋白的N末端和C末端连接。

6.根据权利要求1所述的分离构建体，其中第一和第二LRP6 scFv通过直接融合于人血清白蛋白直接与人血清白蛋白的N末端和C末端连接。

7.根据权利要求1所述的分离构建体，其中人血清白蛋白选自突变人血清白蛋白或人血清白蛋白片段。

8.根据权利要求7所述的分离构建体，其中突变人血清白蛋白包含突变C34S和N503Q。

9.根据权利要求所述7的分离构建体，其中人血清白蛋白片段包含选自DI、DII、DIII和DIV的至少一个人血清白蛋白结构域。

10.根据权利要求1所述的分离构建体，其中scFv片段包含与未突变的scFv片段相比而改善scFv稳定性的至少一个氨基酸突变，其中所述氨基酸突变选自图32-35。

11.根据权利要求10所述的分离构建体，其中scFv片段与LRP6的螺旋桨1区结合并且包含与未突变的scFv片段相比而改善scFv稳定性的至少一个氨基酸突变，其中所述氨基酸突变选自S34M和S49A。

12.根据权利要求10所述的分离构建体，其中scFv片段与LRP6的螺旋桨3区结合并且包含与未突变的scFv片段相比而改善scFv稳定性的至少一个氨基酸突变，其中所述氨基酸突变是M95F。

13.根据权利要求10所述的分离构建体，其中scFv片段与LRP6的螺旋桨1区结合并且包含与未突变的scFv片段相比而改善scFv稳定性的至少一个氨基酸突变，其中所述氨基酸突变选自S34M和S49A；和与LRP6的螺旋桨3区结合的scFv片段，所述scFv片段包含与未突变的scFv片段相比而改善scFv稳定性的至少一个氨基酸突变，其中所述氨基酸突变是M95F。

14.根据权利要求1所述的分离构建体，其中构建体抑制LRP6的磷酸化，如通过Wnt配体诱导的磷酸化测定法所评估。

15.根据权利要求1所述的分离构建体，其中如通过选自以下的测定法所确定，构建体具有以下功能活性：耗尽细胞群体、抑制或减少细胞群体增殖、抑制或减少炎性介质从细胞群体分泌、抑制或减少胞质颗粒从细胞群体分泌，其中细胞群体选自肿瘤细胞和Wnt依赖性细胞。

16.根据权利要求1所述的分离构建体，其中与无半寿期延长物的LRP6结合部分相比，构建体显示约5小时的增加的半寿期。

17.分离的低密度脂蛋白相关蛋白6(LRP6)构建体，包含SEQ ID NO:293或与SEQ ID NO:293具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

18.分离的低密度脂蛋白相关蛋白6(LRP6)构建体，包含SEQ ID NO:295或与SEQ ID NO:295具有至少95％序列同一性的氨基酸序列。

19.核酸，包含编码根据权利要求1所述的低密度脂蛋白相关蛋白6(LRP6)构建体的核苷酸序列。