[发明专利]抗原结合蛋白及其用作治疗癌症的定位产品的用途

权利要求书

1.一种用于筛选单克隆抗体或其结合片段的体外方法，所述单克隆抗体或其结合片段能够将兴趣分子递送或内在化至在其表面表达Axl蛋白的哺乳动物细胞中，所述兴趣分子共价连接到所述单克隆抗体，特征在于其包含以下步骤：

a)选择能够i)以至少10^-9M的EC₅₀结合人蛋白Axl细胞外ECD；并且ii)诱导至少200的平均荧光强度降低的单克隆抗体；

b)将兴趣分子共价连接至步骤a)中选择的单克隆抗体从而形成复合物；

c)将步骤b)中获得的复合物与在其表面表达Axl蛋白的哺乳动物细胞相接触；

d)确定是否所述复合物已被细胞内递送或内在化至在其表面表达Axl蛋白的所述哺乳动物细胞内；和

e)选择所述单克隆抗体作为能够将兴趣分子递送或内在化至在其表面表达Axl蛋白的哺乳动物细胞内的化合物。

2.根据权利要求1所述的方法，特征在于步骤a)中选择的单克隆抗体能够结合人蛋白Axl。

3.根据权利要求2所述的方法，特征在于步骤a)中选择的单克隆抗体能够结合如序列SEQ ID No.31或32所示的人蛋白Axl细胞外ECD。

4.根据权利要求1或2之一所述的方法，特征在于步骤a)中选择的单克隆抗体能够以10^-9M和10^-12M之间的EC₅₀结合人蛋白Axl细胞外ECD。

5.根据权利要求1或2中的一项所述的方法，特征在于步骤e)中的选择可以通过选自免疫荧光、流式细胞术、western印迹和细胞毒性/细胞抑制评价方法的方法来实现。

6.一种用于制备细胞毒性或细胞抑制复合物的体外方法，所述细胞毒性或细胞抑制复合物能够将细胞毒性化合物递送至在其表面表达Axl蛋白的哺乳动物细胞内，所述方法包括将细胞毒性剂或细胞抑制剂共价连接到单克隆抗体的步骤，所述单克隆抗体的特征在于：

i)以至少10^-9M的EC₅₀结合人蛋白Axl细胞外ECD，

ii)诱导至少200的平均荧光强度降低，和

iii)当所述Axl蛋白表达于所述哺乳动物细胞表面时，其结合所述Axl蛋白后内在化至哺乳动物细胞内。

7.一种用于制备能够将细胞毒性化合物递送至哺乳动物细胞内的细胞毒性或细胞抑制复合物的体外方法，所述方法包括将细胞毒性剂共价连接至化合物的步骤，所述化合物：

i)以至少10^-9M的EC₅₀结合人蛋白Axl细胞外ECD；

ii)诱导至少200的平均荧光强度降低，和

iii)当所述Axl蛋白表达于所述哺乳动物细胞表面时，其结合所述蛋白Axl后被内在化至哺乳动物细胞内。

8.一种单克隆抗体或其抗原结合片段，作为定位产品用于将细胞毒性剂递送至宿主靶标位点，所述宿主靶标位点由定位于蛋白Axl细胞外结构域中的表位组成，所述单克隆抗体包含：

分别如SEQ ID NO.1、2和3所示的三个轻链CDR；以及

分别如SEQ ID NO.4、5和6所示的三个重链CDR。

9.根据权利要求8所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，特征在于所述单克隆抗体：

i)以至少10^-9M的EC₅₀结合人蛋白Axl细胞外ECD中的表位；

ii)诱导至少200的平均荧光强度降低，和

iii)其结合所述人蛋白Axl后被内在化。

10.根据权利要求8或9任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于蛋白Axl细胞外结构域由如序列SEQ ID NO.31或32所示的人蛋白Axl细胞外结构域组成。