[发明专利]用于针对金黄色葡萄球菌免疫的稳定组合物

说明书

本申请要求2011年12月23日提交的美国临时申请61/580.191的权益，它们所有的完整内容特此通过引用并入本文用于所有目的。

技术领域

本发明涉及包含源自金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的抗原的免疫原性组合物和它们在免疫中的用途。

背景技术

金黄色葡萄球菌(S.aureus)是一种革兰氏阳性的球形细菌，且是血流、下呼吸道、皮肤和软组织感染的主要原因。它造成从轻微皮肤感染至危及生命的疾病的许多疾病，并且与金黄色葡萄球菌有关的美国每年死亡率超过任意其它传染性疾病(包括HIV/AIDS)的死亡率。

目前没有批准的针对金黄色葡萄球菌的疫苗。与安慰剂组相比，基于得自细菌类型5和8的表面多糖的混合物的疫苗StaphVAX^TM在2005年的III期临床试验中没有减少感染。参考文献1报道了关于得自Merck和Intercell的“V710”疫苗的数据，该疫苗是基于单一抗原IsdB，一种保守的隔离铁的细胞表面蛋白[2，3]。

参考文献4公开了不同的金黄色葡萄球菌抗原和它们的组合，包括“Combo-1”(EsxA、EsxB、突变体Hla、Sta006和Sta011的混合物)和“Combo-2”(EsxA、EsxB、IsdA、Sta006和Sta011的混合物)。在关于这些抗原的其它工作中，本发明的发明人已经观察到，金黄色葡萄球菌多肽抗原在简单缓冲溶液中可以是不稳定的。抗原的不稳定性是不希望的，因为：(1)它不允许疫苗在施用之前储存长时间段；(2)降解产物在施用时可能是有害的(例如抑制性的)；和(3)批与批之间的疫苗不一致性不会满足质量要求和管理批准要求。因此，本发明的一个目的是，稳定化免疫原性组合物中的金黄色葡萄球菌多肽抗原。

发明内容

发明人已经发现，向疫苗制剂中添加稳定添加剂可有效地增强抗原稳定性。一种合适的稳定添加剂是EDTA，因为这被证实可特别有效地稳定化抗原。发明人认为，EDTA可能在抑制氧化还原反应中起作用，具体地通过螯合在抗原的降解机制中涉及的金属离子，或通过抑制金属蛋白酶对抗原的降解。发明人还已经证实，低浓度的EDTA(例如低于100mM)在疫苗制剂中的存在对疫苗的热特性没有显著影响，且不会引起任何不希望的塑化效应，从而意味着含有EDTA的组合物可以被冻干以进一步增加储存稳定性。

因而，本发明提供了一种免疫原性组合物，其包含EsxA抗原、EsxB抗原和稳定添加剂。所述组合物可以呈水性形式，在该情况下，它理想地具有5-6.5的pH。所述组合物还可以包括佐剂例如铝盐。

使用EDTA和5-6.5的pH的组合会在稳定化金黄色葡萄球菌疫苗的抗原中提供协同效应。优选地，所述pH是约6。

可以将EsxA和EsxB抗原组合为如下面讨论的杂合多肽，例如含有在EsxA抗原的下游的EsxB抗原的EsxAB杂合体。所述EsxAB杂合多肽可以以单体或寡聚体形式存在。所述寡聚体可以是二聚体、三聚体或更多。

本发明还提供了二聚体形式的EsxAB杂合多肽。在有些条件下，EsxAB的单体和二聚体形式在溶液中达到平衡。所述二聚体形式通过2个单体分子的二聚化形成，所述二聚化通过每个EsxAB单体的独特半胱氨酸残基的硫醚基团实现。所述单体形式在免疫原性组合物中是优选的，因为它比二聚体形式更稳定，并且二聚体形式的产生(例如通过氧化反应)是不一致的，所以导致纯度变化。发明人已经观察到，EDTA会稳定化EsxAB单体形式并保持制剂的总体高选择性(即单体EsxAB相对于总EsxAB的高比例)。