[发明专利]用于从蛋白质溶液中除去病毒的方法

说明书

发明领域

本发明涉及一种用于纯化蛋白质的方法。

发明背景

分离自动物来源的蛋白质当例如在食品或药物产品中使用这些蛋白质时易于被不需要的病毒颗粒和/或病毒DNA污染。已知用于纯化此类蛋白质还将降低病毒颗粒和/或病毒DNA的水平的方法，例如层析、过滤、离心、提取或沉淀。然而，在一些情况下，纯化一种感兴趣的蛋白质是困难的、耗时的和/或昂贵的。所以，本发明的一个目的是提供一种用于从感兴趣的蛋白质中除去任何受污染的病毒颗粒和/或病毒DNA的方法。此类方法在工业规模中应该是快速的、有用的、廉价且有效的。

胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是一种发现于许多脊椎动物的消化系统内并在其中水解蛋白质的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶在哺乳动物的胰脏中以高数量可获得，并且例如猪胰蛋白酶和牛胰蛋白酶可以相当容易地纯化。因此，胰蛋白酶已经被广泛地应用于各种生物技术工艺中。另外，将胰蛋白酶用于婴儿食品中以预消化蛋白质。

2型猪环状病毒(PCV2)是一种在真核细胞中自主复制的小的无包膜病毒。它是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病原，该综合征是一种在猪中新出现的且多因素的疾病。

本发明的一个目的是提供一种用于从提取自猪胰腺的胰蛋白酶中除去PCV2病毒颗粒和/或病毒DNA的方法。

发明概述

本发明提供了一种用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括：

a)将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至该溶液中，

b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分开，

c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度，并且

d)从该溶液中收集沉淀的靶蛋白。

发明详细说明

本发明提供了一种用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括：

a)将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至该溶液中，

b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分开，

c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度，并且

d)从该溶液中收集沉淀的靶蛋白。

为避免任何可能的疑问：以书面顺序进行这些步骤。即，在步骤b)中进行分离，以将步骤a)的沉淀材料与包括该靶蛋白的溶液分开。在步骤c)中，向在步骤b)中获得的溶液中添加另外量的丙酮。并且在步骤d)中，从该溶液中收集步骤c)的沉淀的靶蛋白。

该靶蛋白可以是任何蛋白质。它可以是一种分离自微生物，例如分离自细菌细胞或真菌细胞的蛋白质。它可以是一种分离自植物的蛋白质。优选地，它是一种分离自动物来源的蛋白质。此类蛋白质可能易于被例如源自表达了该蛋白质的来源生物的病毒颗粒和/或病毒DNA污染。

可以从一种哺乳动物来源获得该靶蛋白。它可以获得自哺乳动物组织，例如获得自哺乳动物腺体。在一个优选实施例中，该靶蛋白获得自牛或猪胰脏。在一个更优选实施例中，该靶蛋白获得自猪胰脏。

该靶蛋白可以是一种酶，优选是一种活性酶或可以被再活化的酶。

可以获得自哺乳动物胰脏(例如获得自猪胰脏)的酶类包括但不限于：蛋白酶，包括但不限于胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶B、胰肽酶E、羧肽酶A以及羧肽酶B；脂肪酶，包括但不限于甘油酯水解酶(脂肪酶)、磷脂酶A1、磷脂酶A2以及甾醇酯水解酶；核酸酶，包括但不限于核糖核酸酶以及脱氧核糖核酸酶；淀粉酶，包括但不限于α-淀粉酶。

在一个优选实施例中，该靶蛋白是一种蛋白酶，优选是一种获得自哺乳动物来源的蛋白酶，例如获得自胰脏，优选获得自牛或猪胰脏，更优选获得自猪胰脏。

在一个更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶，优选获得自胰脏的胰蛋白酶，更优选获得自牛或猪胰脏的胰蛋白酶，甚至更优选获得自猪胰脏的胰蛋白酶。

包括该靶蛋白的水溶液优选地具有一个低的导电性，例如低于3mS或低于1mS。这可以例如通过渗滤获得，例如使用具有10,000Da的截留的膜。包括该靶蛋白的水溶液优选具有约2-5，例如约3-4，优选约3.1-3.9，如约3.5的pH。

该水溶液的干物质浓度可以是约8％-20％，例如约8％-15％，如约10％。