[发明专利]具有改进活性的DNA聚合酶

权利要求书

1.DNA聚合酶，其相比于对照DNA聚合酶具有增强的逆转录酶效率，其中对应于SEQ ID NO:1的616位的所述DNA聚合酶的氨基酸是除I以外的任何氨基酸，并且其中所述对照DNA聚合酶具有与所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列，除了对应于SEQ ID NO:1的616位的所述对照DNA聚合酶的氨基酸是I之外。

2.权利要求1的DNA聚合酶，其中所述DNA聚合酶包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的氨基酸序列。

3.权利要求1或2中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的616位的所述DNA聚合酶的氨基酸是M。

4.权利要求1-3中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸是除D以外的任何氨基酸。

5.权利要求4的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的氨基酸选自L、G、T、Q、A、S、N、R和K。

6.权利要求1-5中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的709位的氨基酸是除I以外的任何氨基酸。

7.权利要求6中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的709位的氨基酸选自K、R、S、G和A。

8.DNA聚合酶，其相比于对照DNA聚合酶具有增强的逆转录酶效率，而无DNA依赖性聚合酶活性的实质性降低，其中对应于SEQ ID NO:1的616位的所述DNA聚合酶的氨基酸是除I以外的任何氨基酸，并且对应于SEQ ID NO:1的709位的氨基酸是除I以外的任何氨基酸，并且其中所述对照DNA聚合酶具有与所述DNA聚合酶相同的氨基酸序列，除了对应于SEQ ID NO:1的616位的所述DNA聚合酶的氨基酸是I，并且对应于SEQ ID NO:1的709位的氨基酸是I之外。

9.权利要求8的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的DNA聚合酶的氨基酸是除D或E以外的任何氨基酸。

10.权利要求8或9中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的616位的所述DNA聚合酶的氨基酸是M。

11.权利要求8-10中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的709位的所述DNA聚合酶的氨基酸是K。

12.权利要求8-11中任一项的DNA聚合酶，其中对应于SEQ ID NO:1的580位的所述DNA聚合酶的氨基酸是G。

13.重组核酸，其编码权利要求1-12中任一项的DNA聚合酶。

14.表达载体，其包含权利要求13的重组核酸。

15.宿主细胞，其包含权利要求14的表达载体。

16.产生DNA聚合酶的方法，所述方法包括：

在适合于表达编码DNA聚合酶的核酸的条件下培养权利要求15的宿主细胞。

17.进行引物延伸的方法，其包括：

在适合于引物延伸的条件下，使权利要求1-12中任一项的DNA聚合酶与引物、多核苷酸模板和核苷三磷酸接触，从而产生延伸的引物。

18.产生延伸的引物的试剂盒，其包含：

至少一个提供权利要求1－12中任一项的DNA聚合酶的容器。

19.权利要求18的试剂盒，其进一步包含一种或多种选自下列的另外的容器：

（a）提供在引物延伸条件下能够与预定多核苷酸模板杂交的引物的容器；

（b）提供核苷三磷酸的容器；和

（c）提供适合于引物延伸的缓冲液的容器。

20.反应混合物，其包含权利要求1-12中任一项的DNA聚合酶、至少一种引物、多核苷酸模板和核苷三磷酸。