[发明专利]衍生自瓜氨酸化的14-3-3的抗原及其在风湿性关节炎诊断中的用途

说明书

发明领域

本发明概括而言涉及被存在于患关节炎病症患者的血清中的血清自身抗体、特别是抗14-3-3自身抗体特异性结合的瓜氨酸化的肽。此种肽包含瓜氨酸化的14-3-3η序列、或其一部分，其中在天然序列中的精氨酸已经脱亚氨化成瓜氨酸。本发明还涉及这类肽评价关节炎病症包括风湿性关节炎的用途和涉及这类瓜氨酸化的肽的抗体。

发明背景

关节炎、或关节痛，一般指身体关节的炎症，且通常伴有疼痛、肿胀和僵硬。关节炎可由包括感染、创伤、退行性疾病、代谢失调或障碍或其它未知的致病源的若干原因中的任何原因引起。

风湿性关节炎(RA)，例如，是滑膜的慢性炎症，并且是最常见的全身性自身免疫性疾病之一。RA的诊断主要依赖于临床表现，但实验室结果在鉴别诊断和疾病管理方面有帮助。RA的早期诊断在疾病的治疗和管理方面都很重要。Kim和Weisman(2000)Arthritis.Rheum.43:473-84。

受影响的患者的血清含有可以是该疾病标志物的因子，允许早期诊断。历史上，类风湿因子(RF)是RA的初级血清学指标之一很久了。另外，抗角蛋白自身抗体(AKA)，亦称抗核周自身抗体，在40-55％的RA患者中和在40-50％的RF阴性的临床确诊的RA患者中检测到。Vincent等(1989)Ann.Rheum.Dis.48:712-22；Corconnier等(1996)Br.J.Rheumatol.35:620-4；Gabay等(1993)Ann.Rheum.Dis.52:785-9。AKA通常被认为比RF显著地更具有特异性。另外，AKA可能在RA临床显现之前数月或数年显现。发明名称为“表征关节炎病症的组合物和方法(Compositions and Methods for Characterizing Arthritic Conditions)”的PCT公开号2010102412也描述了针对14-3-3蛋白的自身抗体和采用它们评价关节炎病症如RA的方法。例如，14-3-3η一般为细胞内蛋白且只有在疾病状态它释放到细胞外间隙中。因而，血清14-3-3η和/或针对它的自身抗体具有作为标志物的诊断应用价值，它补充了早期的和确定的RA的其它血清学指标且与RA和PsA中的关节损害有关。

最近发现AKA识别含有瓜氨酸的表位。von Venrooj(2000)Arthritis Res.52:785-9。瓜氨酸化为一种翻译后修饰(PTM)的形式，藉此肽基精氨酸脱亚胺酶(PAD)催化氨基酸精氨酸(R)脱亚胺基成瓜氨酸(C)导致释放氮基部分的化学变化。失调的瓜氨酸化似乎是炎性病症如RA中的激活过程，藉此“伤害”导致1)PAD的活化；2)PAD酶类释放到滑膜间隙中；3)细胞外蛋白质如波形蛋白和角质纤丝聚集蛋白的瓜氨酸化；4)抗瓜氨酸化抗原的体液免疫应答和5)疾病的永久化(perpetuation)。检测这些抗瓜氨酸化抗体还可用于RA的早期诊断。

已经证明抗含有瓜氨酸的合成肽(被称为CCP(环状瓜氨酸化肽))的IgG抗体在将RA区分于其它自身免疫性疾病中优于AKA或RF试验，抗CCP抗体的存在与RA患者中提高的RF水平无关。然而，很大百分比的患者对抗CCP是血清反应阴性的或保持血清反应阴性。因此，在技术上仍然非常需要该疾病的更好和更特异性的诊断信号。

发明概述

如本文中公开的，经由电脑模拟、在体外和使用临床样品鉴定人14-3-3η的瓜氨酸化位点。将14-3-3η的瓜氨酸化形式和/或对这些翻译后修饰特异性的抗14-3-3自身抗体与天然的或非瓜氨酸化的14-3-3η形式比较，可用来风湿性关节炎的诊断和预测，包括在抗CCP阴性患者中。尤其，且如本申请中首次公开的，14-3-3η代表一种新的瓜氨酸化靶标，其在抗CCP阴性的RA患者中与健康对照中有差别地表达，表明检测该瓜氨酸化的蛋白、和/或对瓜氨酸化的-14-3-3η特异性的自身抗体可显著地改进RA诊断。

因此，本发明提供包含瓜氨酸化的14-3-3η蛋白或其瓜氨酸化的片段的组合物和用它们例如诊断和预测风湿性关节炎的方法。本申请中还提供包含选择性与瓜氨酸化的14-3-3η蛋白结合和/或与所述蛋白内特定的瓜氨酸化位点结合的单克隆抗体的组合物、和使用该单克隆抗体的方法，其中瓜氨酸化的14-3-3η蛋白与天然的或非瓜氨酸化的形式相反。