[发明专利]用于检测SNAP/CLIP标记物的单克隆抗体

说明书

本发明涉及用于检测SNAP/CLIP标记物的单克隆抗体,编码该抗体的核酸和该抗体用于检测含有SNAP/CLIP标记物的蛋白的用途。

SNAP和CLIP标记技术是一种相对年轻的技术。它是给靶蛋白，特别是融合蛋白提供所需配体的精细方法。

WO20009/114748A1披露了SNAP-25组合物，制造α-SNAP-25抗体的方法，α-SNAP-25抗体，检测BoNT/A活性的方法和检测中和α-BoNT/A抗体的方法，所述α-SNAP-25抗体与某种表位结合，而所述表位包含SNAP-25切割产物的BoNT/A切割位点易切断键的P1残基处的羧基末端。

M.Yamamoto,L.Hassinger,J.E.Crandall在Journal of Neurocytology19,619-627(1990)报道了阶段特异性神经突相关蛋白在发育中大鼠大脑和小脑皮质中的超微结构定位。SNAP/TAG-1是135kDa的糖蛋白，在发育的啮齿动物CNS中生长轴突子集的表面表达。采用免疫电子显微术和识别SNAP/TAG-1(4D7)的单克隆抗体以及过氧化物酶偶联的二抗，分析了大鼠的胚胎期第17天大脑皮层和出生后第4天和第8天小脑皮层中这种抗原的超微结构定位。在胚胎皮层，免疫反应性与位于中间区(intermediate zone)，基底板(subplate)和皮质板(cortical plate)的有限组的神经轴突的质膜，神经元胞体(neuronal somata)以及它们的主导过程相关。免疫反应性轴突结合在一起成为10-20个的一组，并与非免疫反应性轴突隔开。有些生长锥呈免疫反应性，然而不是所有4D7-免疫反应性轴突的生长锥显示染色。在出生后的小脑中，免疫反应活性与位于外部颗粒细胞层(external granule cell layer)的最内部分的颗粒细胞的胞体和轴突相关。在大脑和小脑皮层，免疫反应活性以间插方式出现在相邻细胞膜的对应点，规律性的周期为100-200nm。该文献讨论了SNAP/TAG-1用作发育CNS中特定亚组轴突的粘附分子的可能性。

Richard J Ward,John D Pediani,和Graeme Milligan在British Journal Pharmacology(2011),162,1439-1452中报道了通过N-端SNAP和CLIP-标记技术评估配体诱导的食欲肽OX₁和大麻素CB₁受体的内在化。通过抗体识别表位标签和荧光团与O⁶-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶变体的共价结合检测每一种受体结构的细胞表面形态。可采用各方法监测对激动剂而非拮抗剂作起反应的受体内在化，但当使用SNAP标记物的新型、时间分辨荧光探针时，灵敏度最高是其它方法的6-10倍以上。然而，就CLIP标记物而言，灵敏度没有提高，可能由于非特异性结合水平较高。

SNAP标记物基于人DNA修复酶O(6)-烷基鸟嘌呤-DNA烷基转移酶。后者已通过引入突变而得到改变，其改变程度使得可以选出具有更小分子体积并对苄基鸟嘌呤具有极高亲和力的蛋白变体。SNAP标记物与苄基鸟嘌呤衍生物高度特异性反应，使苄基与和自身共价偶联的底物结合并切除鸟嘌呤。作为一种重组蛋白标记物，它能共价和化学计量地限定各种苄基鸟嘌呤修饰底物与融合蛋白的偶联。CLIP标记物是通过诱变从SNAP形成，其与苄基胞嘧啶衍生物而非苄基鸟嘌呤发生高度特异性反应。因此，可能在一个实验方法中同时差别性标记SNAP和CLIP标记物。SNAP技术(SNAP/CLIP质粒和底物)由新英格兰生物试验室公司(NEB)分销。

在Journal of Biomedicine and Biotechnology,Vol.2010的ID658954,doi:10.1155/2010/658954的文章中Aliprandi等人披露了一种以VHH形式的重组抗SNAP的抗体。

有一种能同时检测CLIP和SNAP标记物的分析工具是最好了。

本发明的目的通过权利要求1所述的抗体得以实现。本发明的单克隆抗体特异性地结合SNAP标记物基序和CLIP标记物并包含具有氨基酸序列SEQ IDNo.3,4,5和8,9,10的CDR。特别是，本发明的抗体是鼠科抗体。

本发明的主题也是编码本发明抗体的核酸，特别是具有SEQ ID No.1或6所示核酸序列的核酸。