[发明专利]纤维蛋白原测定

说明书

技术领域

本发明整体涉及用于在凝血酶存在下检测纤维蛋白原的免疫测定法。

背景技术

血液是液体组织，包括分散于液相中的红细胞、白细胞、触觉小体和血小板。液相是血浆，其包括酸、脂质、溶解的电解质和蛋白质。存在于液相中的一种特定蛋白质是纤维蛋白原。当发生出血时，纤维蛋白原与凝血酶(一种酶)反应，以形成不可溶的纤维蛋白凝块。

在广泛多样的情况下，动物包括人可遭受由于伤口或外科手术期间的出血。在一些情况下，出血是相对少量的，并且除施加简单急救之外的正常血液凝固功能是所需要的全部。在其它情况下，可发生大量出血。这些情况通常需要专门的设备和材料以及受过训练的施用适当援助的人员。

在解决上述问题的努力中，已开发了用于控制过量出血的材料。局部吸收性止血剂(TAH)广泛用于外科应用中。TAH涵盖基于多种织造或非织造织物或海绵的产品，通常由至少部分吸收性的材料制成，范围从天然聚合物到合成聚合物以及它们的组合，包括基于丙交酯-乙交酯的共聚物，例如Polyglactin910、氧化纤维素、氧化再生纤维素(ORC)、明胶、胶原、几丁质、壳聚糖等。为了提高止血性能，可将基于上述材料的支架与生物衍生的凝血因子(例如凝血酶和/或纤维蛋白原)相结合。

目前市场上可用的或正在开发中的多种止血制剂采用冻干纤维蛋白原，常与冻干凝血酶结合，并且止血制剂以干粉、半液体糊剂、液体制剂的形式应用或任选地设置在支承支架(例如吸收性织物支架)上。

多个现有技术参考文献涉及纤维蛋白或纤维蛋白原的血浆分析以及相关测定、单克隆抗体(mAB)的开发以及针对纤维蛋白原降解产物的mAB。这些现有技术参考文献提出在样品中不存在凝血酶(或仅存在失活前体凝血素)的测定；不适用于干燥冻干的目标蛋白质；没有溶解步骤和/或凝血酶失活步骤。

一篇名称为“Useful laboratory tests for studying thrombogenesis in acute cardiac syndromes”(“用于研究急性心脏综合征中的血栓形成的可用实验室测试”)，Fareed等人，Clinical Chemistry《临床化学》，44(8Pt2)：1845-53，1998年的文章公开了在ELISA和放射免疫测定法中将纤维蛋白肽A(FpA)的抗体用于临床应用，这是FpA的抗体作为血栓(血管内血块)标记物的常见用途。

一篇名称为“Fibrin detected in plasma of patients with disseminated intravascular coagulation by fibrin-specific antibodies consists primarily of high molecular weight factor XIIIa-crosslinked and plasmin-modified complexes partially containing fibrinopeptide A”&(“通过纤维蛋白特异性抗体在弥散性血管内凝血患者的血浆中检测到的纤维蛋白主要由与高分子量因子XIIIa交联并经纤溶酶修饰且部分包含纤维蛋白肽A的复合物构成”)，Pfitzner等人，Thrombosis Haemostasis《血栓形成与止血法》，78(3)：1069-78，1997年的文章公开了来自凝血系统被活化的患者的血浆样品通过不同抗体(包括纤维蛋白肽A的抗体)进行评估，以表征凝块复合物中的纤维蛋白原/纤维蛋白。起始样品材料为血浆。

一篇名称为“The conversion of fibrinogen to fibrin：recombinant fibrinogen typifies plasma fibrinogen”(“纤维蛋白原向纤维蛋白的转化：重组纤维蛋白原是血浆纤维蛋白原的典型代表”)，Gorkun等人，Blood.《血液》，89(12)：4407-14，1997年的文章公开了使用HPLC对由两种形式的纤维蛋白原释放的FpA的量进行定量。起始样品材料为液体(血浆)。