[发明专利]新的分离的具有大肠杆菌特异性杀菌活性的噬菌体和包括其的抗菌组合物

说明书

[技术领域]

本发明涉及新的分离的显示大肠杆菌(E.coli)特异性杀菌活性的噬菌体，和包括其的抗菌组合物。

[背景技术]

大肠杆菌是革兰氏阴性的、短的杆状细菌——属于埃希氏菌属(Escherichia)和肠杆菌科(Enterobacteriaceae)，并发现作为包括哺乳动物在内的多种动物的肠正常菌群的部分。据显示，大肠杆菌的大多数菌株是非致病的和可引起机会感染，但是一些高致病性菌株在包括人在内的哺乳动物中引起种种肠疾病和败血病。它们之中，引起胃肠疾病的菌株可基于它们的毒力主要分成六组：肠产毒性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli)(ETEC)、肠致病性大肠杆菌(Enteropathogenic E.coli)(EPEC)、肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic E.coli)(EHEC)、肠聚集性大肠杆菌(Enteroaggregative E.coli)(EAEC)、肠侵袭性大肠杆菌(Enteroinvasive E.coli)(EIEC)、和产坏死性毒素大肠杆菌(Necrotoxigenic E.coli)(NTEC)。已知肠产毒性大肠杆菌(ETEC)与猪中的感染有关。一般而言，由细菌或病毒感染引起的疾病可通过病原体的识别而诊断。然而，由于大肠杆菌存在于健康动物的肠中，由大肠杆菌感染引起的疾病的早期诊断是困难的(韩国专利号963157)。

ETEC是革兰氏阴性的杆状细菌，或具有周生鞭毛能动的，或无鞭毛不能动的。ETEC是需氧或兼性厌氧菌——从乳糖和果糖产生酸和气体，并在7-48℃之间的温度——温度最佳在35-37℃——和在pH4.5-9.0在普通培养基上生长良好。ETEC产生与霍乱毒素相似的毒素，并且该毒素可被分成热不稳定肠毒素(LT)——当在60℃加热10分钟时丧失其活性——和热稳定肠毒素——在100℃加热30分钟之后显示抵抗力。当被感染时，显示霍乱样症状，并且它在小肠上部增殖，细菌浓度达到每ml为10⁷-10⁸cfu(集落形成单位)，导致大肠杆菌感染疾病的发生。

最近，鉴于大规模企业猪生产的趋势，猪中大肠杆菌病已成为猪舍中常见和频繁出现的问题(Park Young-il,Sun-Jin Publishing Co.353-359,1998)。在韩国，最近猪大肠杆菌病的渐增发生已由于腹泻而引起幼猪的生长迟缓和死亡，导致农户巨大的经济损失(Hong Eu-Chul,master's thesis,Dankook University,Addition Effect of Egg Yolk in Early Weaned Piglets,2001)。许多抗生素已用于猪大肠杆菌病的预防和治疗，但是抗生素的误用和过度使用已引起猪中抗药性和药物残留的严重问题。因此，抗生素的使用已在全世界许多国家中被限制(Mason HS et al.,Trends in Biotech.13:388-392,1995)。

同时，噬菌体是特化的病毒类型，其只感染特定细菌和控制细菌生长，并只可在宿主细菌内自我复制。噬菌体由单链或双链DNA或RNA形式的遗传物质组成。基于它们的形态学，噬菌体被分成肌病毒科、管状病毒科、和短尾病毒科，其被分别表征为收缩的、长的非收缩的和短的尾(Arch Virol(2001)146:843-857；Elizabeth Kutter et al.,Bacteriophages Biology and Application；CRC press)。

发现噬菌体之后，最初大量努力放在利用它们用于传染病治疗。然而，与具有广泛目标谱的抗生素相比，噬菌体由于具有特异的目标谱而被看作不必要的。然而，抗生素的误用和过度使用引起了关于抗生素抗性菌和食物中残留抗生素的有害作用的日益高涨的关注(Cislo,M et al.Arch Immunol.Ther.Exp.1987.2:175-183；Kim sung-hun et al.,bacteriophage,New Alternative Antibiotics.BRIC)。

这些日益增长的关注已导致对噬菌体注意的再现。控制大肠杆菌O157:H的七种噬菌体在美国专利号6,485,902(2002)中公开，控制多种微生物的两种噬菌体在美国专利号6,942,858中公开(2005年授予Nymox)。

[发明内容]

[技术问题]