[发明专利]用于生产1,3-丁二醇的真核生物和方法

权利要求书

1.一种非天然存在的包含乙酰辅酶A途径的真核生物，其中所述生物包含至少一种编码乙酰辅酶A途径酶的外源核酸，所述乙酰辅酶A途径酶以足以实现下述的量表达：将乙酰辅酶A从所述生物的线粒体运输至所述生物的细胞溶质和/或增加所述生物的细胞溶质中的乙酰辅酶A，其中所述乙酰辅酶A途径包含选自以下的途径：

i.2A、2B和2D；

ii.2A、2C和2D；

iii.2A、2B、2E和2F；

iv.2A、2C、2E和2F；

v.2A、2B、2E、2K和2L；和

vi.2A、2C、2E、2K和2L；

其中，2A是柠檬酸合酶；2B是柠檬酸转运蛋白；2C是柠檬酸/草酰乙酸转运蛋白或柠檬酸/苹果酸转运蛋白；2D是ATP柠檬酸裂合酶；2E是柠檬酸裂合酶；2F是乙酰辅酶A合成酶；2K是乙酸激酶；且2L是磷酸转乙酰酶。

2.根据权利要求1所述的生物，其中，所述乙酰辅酶A途径进一步包含2G、3I和/或3J，其中2G是草酰乙酸转运蛋白，3H是细胞溶质苹果酸脱氢酶，3I是苹果酸转运蛋白，且3J是线粒体苹果酸脱氢酶。

3.一种非天然存在的包含乙酰辅酶A途径的真核生物，其中，所述生物包含至少一种编码乙酰辅酶A途径酶的外源核酸，所述乙酰辅酶A途径酶以足以实现下述的量表达：增加所述生物的细胞溶质中的乙酰辅酶A，其中，所述乙酰辅酶A途径包含选自以下的途径：

i.5A和5B；

ii.5A、5C和5D；

iii.5E、5F、5C和5D；和

iv.5G和5D；

其中，5A是丙酮酸氧化酶(乙酸形成)；5B是乙酰辅酶A合成酶、连接酶或转移酶；5C是乙酸激酶；5D是磷酸转乙酰酶；5E是丙酮酸脱羧酶，5F是乙醛脱氢酶；且5G是丙酮酸氧化酶(乙酰磷酸形成)。

4.一种非天然存在的包含乙酰辅酶A途径的真核生物，其中，所述生物包含至少一种编码乙酰辅酶A途径酶的外源核酸，所述乙酰辅酶A途径酶以足以实现下述的量表达：将乙酰辅酶A从所述生物的线粒体和/或过氧化物酶体运输至所述生物的细胞溶质和/或增加所述生物的细胞溶质中的乙酰辅酶A，其中，所述乙酰辅酶A途径包含选自以下的途径：

i.6A、6D和6C；和

ii.6B、6E和6C；

其中，6A是线粒体乙酰肉碱转移酶；6B是过氧化物酶体乙酰肉碱转移酶；6C是细胞溶质乙酰肉碱转移酶；6D是线粒体乙酰肉碱移位酶；且6E是过氧化物酶体乙酰肉碱移位酶。

5.一种非天然存在的包含乙酰辅酶A途径的真核生物，其中，所述生物包含至少一种编码乙酰辅酶A途径酶的外源核酸，所述乙酰辅酶A途径酶以足以实现下述的量表达：增加所述生物的细胞溶质中的乙酰辅酶A，其中，所述乙酰辅酶A途径包含选自以下的途径：

i.10A、10B和10C；

ii.10N、10H、10B和10C；

iii.10N、10L、10M、10B和10C；

iv.10A、10B、10G和10D；

v.10N、10H、10B、10G和10D；

vi.10N、10L、10M、10B、10G和10D；

vii.10A、10B、10J、10K和10D；

viii.10N、10H、10B、10J、10K和10D；

ix.10N、10L、10M、10B、10J、10K和10D；

x.10A、10F和10D；

xi.10N、10H、10F和10D；和

xii.10N、10L、10M、10F和10D；

其中，10A是PEP羧化酶或PEP羧基激酶；10B是草酰乙酸脱羧酶；10C是丙二酸半醛脱氢酶(乙酰化)；10D是丙二酰辅酶A脱羧酶；10F是草酰乙酸脱氢酶或草酰乙酸氧化还原酶；10G是丙二酰辅酶A还原酶；10H是丙酮酸羧化酶；10J是丙二酸半醛脱氢酶；10K是丙二酰辅酶A合成酶或转移酶；10L是苹果酸酶；10M是苹果酸脱氢酶或氧化还原酶；且10N是丙酮酸激酶或PEP磷酸酶。

6.根据权利要求1-5中的任一项所述的生物，其中，所述真核生物包含2、3、4、5、6、7、8、9或10种各自编码乙酰辅酶A途径酶的外源核酸。