[发明专利]犬源化抗体及其制备方法

权利要求书

1.产生用于施用于靶标种的非免疫原性免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步骤：

-鉴别来自除所述靶标种外的物种的供体免疫球蛋白，其中所述供体免疫球蛋白与所述靶标种中存在的靶表位具有结合特异性，

-确定所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区的氨基酸序列，

-将所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区氨基酸序列的每一氨基酸残基与衍生自所述靶标种的一种或多种免疫球蛋白框架区氨基酸序列中对应位置上存在的氨基酸残基进行比较，以鉴别出所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域的框架区氨基酸序列内，不存在于衍生自所述靶标种的一种或多种免疫球蛋白中的至少一种的框架区的氨基酸序列中对应位置上的一个或多个氨基酸残基，以及

-用衍生自所述靶标种的一种或多种免疫球蛋白中的至少一种的框架区氨基酸序列中对应位置上存在的氨基酸残基取代存在于所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域的框架区氨基酸序列中，但不存在于衍生自所述靶标种的一种或多种免疫球蛋白中的至少一种的框架区氨基酸序列中对应位置上的一个或多个鉴别出的氨基酸残基。

2.如权利要求1所述的方法，其中将所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区氨基酸序列的每一氨基酸残基与氨基酸残基库进行比较，所述氨基酸残基库包含衍生自所述靶标种的多个免疫球蛋白框架区氨基酸序列的对应位置上存在的氨基酸残基。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中，使用保守型取代的原则进行所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区的氨基酸序列中存在的氨基酸残基的取代。

4.如权利要求3所述的方法，其中保守型取代包括用衍生自所述靶标种的一种或多种免疫球蛋白中至少一种的框架区的氨基酸序列中对应位置上存在的氨基酸残基同源取代所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区的氨基酸序列中存在的氨基酸残基。

5.如权利要求4所述的方法，其中，用保守氨基酸残基替换所述供体免疫球蛋白重链和/或轻链可变结构域框架区的氨基酸序列中存在的氨基酸残基，所述保守氨基酸残基与被取代的氨基酸具有共同特征，例如相似侧链、相似电荷和相似疏水性中的至少一种。

6.如权利要求5所述的方法，其中被取代的氨基酸残基和所述替换氨基酸残基都是同一氨基酸组的成员，其中所述组包括：

-(1)非极性残基：Ala(A)、VaI(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)；

-(2)无电荷极性的残基：GIy(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)；以及

-(3)酸性残基：Asp(D)、GIu(E)；以及

(4)碱性的：Lys(K)、Arg(R)、His(H)。

7.如权利要求5所述的方法，其中被取代的氨基酸残基和所述替换氨基酸残基都是同一氨基酸组的成员，其中所述组包括：

-(1)芳香的：Phe(F)、Trp(W)、Tyr(Y)；

-(2)非极性的：Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Ala(A)、Met(M)；

-(3)脂肪族的：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)；

-(4)酸性的：Asp(D)、Glu(E)；

-(5)碱性的：His(H)、Lys(K)、Arg(R)；和

-(6)极性的：Gln(Q)、Asn(N)、Ser(S)、Thr(T)、Tyr(Y)。

8.如权利要求5所述的方法，其中被取代的氨基酸残基和所述替换氨基酸残基都是同一氨基酸组的成员，其中所述组包括：

-(1)疏水性的：Met(M)、Ala(A)、VaI(V)、Leu(L)、Ile(I)；

-(2)中性亲水性的：Cys(C)、Ser(S)、Thr(T)、Asn(N)、Gin(Q)；

-(3)酸性的：Asp(D)、GIu(E)；

-(4)碱性的：His(H)、Lys(K)、Arg R)；

-(5)影响链方向的残基：GIy(G)、Pro(P)；以及

-(6)芳香的：Trp(W)、Tyr(Y)、Phe(F)。