[发明专利]制备高度浓缩的纤维蛋白原溶液的方法以及通过使用其制备纤维蛋白封闭剂的方法

说明书

技术领域

本发明涉及制备高度浓缩的纤维蛋白原溶液的方法和制备包含所述高度浓缩的纤维蛋白原溶液和因子XIII的纤维蛋白封闭剂组分1的方法。更具体地，根据本发明的制备高度浓缩的纤维蛋白原溶液的方法，其特征在于，向从血浆分离的低度浓缩的纤维蛋白原溶液加入氨基酸或氨基酸衍生物、盐类等，然后使用超滤方法由此制备高度浓缩的纤维蛋白原。制备用于纤维蛋白封闭剂产品的纤维蛋白封闭剂组分1的方法，其特征在于，在制备高度浓缩的纤维蛋白原溶液的方法中的超滤前或超滤后加入因子XIII。此处，根据本发明的纤维蛋白封闭剂组分1优选为溶液态。

通过根据本发明的方法制备的纤维蛋白封闭剂组分1可在液态下冷冻，在室温下保存以进行长时间的存储，并立即应用于处理而不进行重构(reconstitution)过程。

另外，本发明涉及由所述纤维蛋白封闭剂组分1和纤维蛋白封闭剂组分2(其为填充在单独的容器中的包含凝血酶和氯化钙的溶液)配置的纤维蛋白封闭剂产品。根据本发明的纤维蛋白封闭剂产品可以其中所述纤维蛋白封闭剂组分1和纤维蛋白封闭剂组分2被分别填充在单独的瓶中的瓶型，或者以其中所述纤维蛋白封闭剂组分1和纤维蛋白封闭剂组分2被填充在彼此连接的单独的注射器中从而可立即使用的预填充型提供。

背景技术

纤维蛋白封闭剂(fibrin sealant)，其被称为纤维蛋白胶或纤维蛋白组织粘合剂，使用人体血液凝结机制。更具体地，血液凝结通过血液凝结因子的链反应进行，并且纤维蛋白原、因子XIII和凝血酶等等参与所述凝结途径的最终步骤。此处，所述纤维蛋白封闭剂使用因子XIII、纤维蛋白原、氯化钙和凝血酶被混合以形成纤维蛋白聚合物的原理，并且这个时候，因子XIII用于交联所述纤维蛋白聚合物，这样所述纤维蛋白聚合物被转化为不能溶解的纤维蛋白聚合物。

所述纤维蛋白封闭剂将上文描述的血液凝结机制应用到粘合剂。也就是说，所述纤维蛋白封闭剂是基于当创伤等发生在组织时，纤维蛋白原与来自创伤组织周围的毛细血管的血液组分一起释放以形成纤维蛋白，从而粘合到所述创伤的周边的原理。用于治疗目的比如粘合到组织和止血的纤维蛋白封闭剂的应用(对愈合创伤等起支撑作用)已在不断扩展。所述纤维蛋白封闭剂除了具有物理优势比如快速粘合、不受粘附性部分的湿度的影响等，还具有生物学优势比如没有血小板凝固障碍、极好的组织相容性以及适当的吸收等，这样使得所述纤维蛋白封闭剂已作为下一代医用粘合剂而备受关注。

基于上文所述的纤维蛋白封闭剂的优势使用所述纤维蛋白封闭剂的粘合作用的外周神经缝合、微血管缝合上的纤维蛋白封闭剂的临床研究已在欧洲进行，并且在日本所述纤维蛋白封闭剂已作为外科粘合剂而用于血管外科、外科、神经外科手术、骨的粘合等。

为了制备该纤维蛋白封闭剂，最初，在欧洲将凝血酶(其为纤维蛋白组分之一)从牛血浆分离以供使用(专利文献1，美国注册专利第4627879号)，但是由于安全问题等而在欧洲以外不销售。另外，尽管已开发出使用自体血的纤维蛋白封闭剂制剂(参见美国专利第4714457号，美国专利第5030215号等)，然而由于需要采血过程和另外的制作过程，临床使用它还是很不方便。

因此，在要进行商业销售的从人血浆制备的纤维蛋白封闭剂中，针对病毒的安全应该是有保证的，并且临床使用应该是便利的。

最近，作为纤维蛋白封闭剂，冷冻干燥型纤维蛋白封闭剂和冷冻液型纤维蛋白封闭剂也被推向市场。在所述冷冻干燥型纤维蛋白封闭剂中，由于纤维蛋白原的分解时间长并且需要相当长的时间进行重构，所以其不便在于所述冷冻干燥的纤维蛋白封闭剂应被迅速使用。另一方面，所述冷冻液产品相对于所述冷冻干燥型产品的优势在于其实际使用需要相当短的时间。代表性的产品为Tisseel(BaxterHealthcare Corp.)。Tisseel作为可在液态下被冷冻的预填充型产品，即，可立即注射的现成注射形式的产品而在售，并且预计作为大大减少使用的制备时间的产品。

然而，在所述冷冻液产品的情况中，存在为了去除来源于血液的任何病毒应进行溶剂/去垢剂(S/D)处理和使用蒸汽的热处理的缺点(参见美国专利第5962405号和Tisseel数据(www.baxter.com))。