[发明专利]改进的疫苗诊断

说明书

技术领域

本发明涉及用于区分(a)施用嵌合瘟病毒的动物与(b)被野生型牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染或用常规BVDV疫苗接种的动物的改进的方法和试剂盒。

背景技术

已经从若干驯养及野生动物种类中分离出包括牛病毒性腹泻病毒(BVD病毒或BVDV)在内的瘟病毒(pestiviruses)。所鉴定的BVDV的宿主包括野牛、羚羊、驯鹿和各种鹿类，同时已经在长颈鹿和叉角羚中鉴定出独特的瘟病毒种属。BVDV是黄病毒科的小RNA病毒。其与作为绵羊的边界病以及猪的经典猪霍乱的病原体密切相关。

特别是在牛中由BVDV引发的疾病广泛散布而且经济上能够是破坏性的。牛中的BVDV感染可导致繁殖问题，并且能够引发流产或早产。BVDV能够透过怀孕的牛的胎盘，并可导致分娩出持续感染(PI)的小牛，其对病毒免疫耐受而且余生持续患病毒血症。感染的牛还可表现出“粘膜病”，其特征是温度升高、腹泻、咳嗽和营养粘膜溃疡。这些持续感染的动物在兽群中提供了病毒散布源以及粘膜病的进一步爆发，并且非常易于诱发造成肠道疾病或肺炎的微生物的感染。

目前可用的BVDV疫苗是含化学灭活的野生型病毒的那些疫苗，或者含修饰性活(ML)BVDV的那些疫苗。BVDV可通过在牛或猪细胞中反复传代或者通过在病毒上提供温度敏感型表型的化学诱导的突变来减弱。然而，现有的灭活和ML疫苗不允许在已接种动物和自然感染的动物之间进行区分。

可能含有野生型病毒中不存在的其他抗原决定子或者缺乏野生型病毒中存在的抗原决定子的“标记”疫苗可以是用于控制该领域中的BVDV感染的有效工具。美国专利申请2010/0360055(Luo等，通过参考以其整体并入本文)描述了后者，即一种基于嵌合瘟病毒疫苗的疫苗，其中BVDV的E^rns蛋白质被来自叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白质置换。该嵌合瘟病毒以UC25548保藏于并赋予保藏号PTA-9939。借助适当的诊断测定，利用该嵌合瘟病毒将允许区分施用该病毒的动物与感染野生型BVDV或接种常规BVDV疫苗的动物。

发明内容

在一个实施方式中，提供了一种用于测定动物是否暴露于BVDV或用常规BVDV疫苗免疫接种的方法，其中所述感染了BVDV或免疫接种了常规BVDV疫苗的动物具有特异性结合存在于BVDV中但是不存在于嵌合瘟病毒中的至少一个E^rns表位的抗体，该嵌合瘟病毒不再表达来自BVDV的E^rns蛋白质，但在BVDV中表达叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白质。

在一个实施方式中，提供了一种用于测定特异性结合BVDV E^rns蛋白质的抗体存在与否的方法，所述方法包括下述步骤：

a)从动物获得血清样品；

b)用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白质或其片段温育所述片段；

c)检测所述样品中所述抗体的存在与否。

在另一实施方式中，提供了用于测定动物是否暴露于BVDV或用常规BVDV疫苗免疫接种的诊断试剂盒，所述试剂盒包括能够检测存在于BVDV中但不存在于嵌合瘟病毒中的至少一个E^rns表位的抗体的试剂，所述嵌合瘟病毒不再表达来自BVDV的E^rns蛋白质，但在BVDV中表达叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白质。

在进一步的实施方式中，提供了抗体的用途，所述抗体结合BVDV或常规BVDV疫苗中存在的表位，但是该表位在嵌合瘟病毒中不存在，所述嵌合瘟病毒不再表达来自BVDV的E^rns蛋白质，但在BVDV中表达叉角羚瘟病毒的E^rns蛋白质。

在另一实施方式中，提供了一种用于测定动物是否具有特异性结合BVDV E^rns蛋白质的抗体的方法，所述方法包括下述步骤：

a)从动物获得血清样品；

b)用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白质或其片段温育所述片段；

c)检测所述动物中所述抗体的存在与否。

在另一实施方式中，提供了一种用于测定特异性结合BVDV E^rns蛋白质的抗体存在与否的方法，其中用叉角羚瘟病毒E^rns蛋白质或其片段温育所述样品的步骤在检测所述样品中所述抗体存在与否的步骤之前进行。