[发明专利]生物产物的单一容器制造

权利要求书

1.一种用于产生并纯化生物产物的方法，其包含：

a)提供适于容纳预定体积的营养培养基的生物反应器，其包含：

i)单次使用的柔性容器，其具有至少一个内壁和内体积；

ii)隔膜，其定位于所述容器内且界定下部室和上部室，所述隔膜具有大小在1μm到1000μm范围内的多个孔，所述孔在所述下部室与所述上部室之间提供流体连通；

iii)在所述上部室中的至少一个液体入口，其具有达到所述上部室的底部的液浸管且与至少一个缓冲溶液源、至少一个营养培养基源和至少一个生物培养物源流体连通；

iv)在所述下部室中的至少一个液体出口，其具有阀以控制流速；

v)与压缩气体源流体连通且位于所述下部室中的至少一个气体入口，其进一步包含定位在所述压缩气体源与所述容器之间的消毒过滤器；

vi)在所述上部室中的至少一个气体出口，其具有控制气体的流速的构件；

vii)加热或冷却所述营养培养基的构件；

b)将所述营养培养基经由所述上部室中的所述液体入口引入所述容器中；

c)将能在所述营养培养基中生长并在所述营养培养基中分泌生物产物的生物培养物经由所述上部室中的所述液体入口引入所述容器中；

d)使用所述加热或冷却构件将所述液体培养基加热或冷却到预定温度；

e)将所述下部室中的所述气体入口连接到压缩气体源；

f)开始使所述压缩气体流动到所述下部室中，其具有足够压力以使气泡穿透所述隔膜中的所述孔，进入所述上部室中且同时打破所述容器中的所述营养培养基的表面；

g)使压缩气体继续以预定流速流动预定时间长度；

h)以预定时间间隔检测所述营养培养基中的所述生物培养物的密度和活力；

i)以预定时间间隔检测所述营养培养基中的所述生物产物的浓度；

i)在所述营养培养基中的所述生物培养物的活力或所述生物产物的浓度达到预定值时，停止压缩气体的流动；

k)经由所述液体入口向所述上部室中添加足量的能结合实质上全部的所述生物产物且粒径大于所述隔膜中的所述孔的直径的色谱介质；

l)开始使压缩气体流动到所述下部室中以搅动所述色谱介质；

m)如果需要，通过经由所述液体入口添加第一缓冲液来调节所述营养培养基的pH和/或导电率，以引起或增强所述生物产物与所述色谱介质的结合；

n)测定所述营养培养基中生物产物的浓度，直到其达到预定的低值为止；

o)打开所述底部室中的所述液体出口；

p)经由所述下部室中的所述液体出口移除并弃去所述营养培养基和所述生物培养物；

q)关闭所述底部室中的所述液体出口；

r)将能从所述色谱介质解离任何已结合或未结合的污染物的第二缓冲液以足以浸没所述色谱介质的量经由所述上部室中的所述液体入口添加到所述容器中；

s)开始所述压缩气体的流动以将所述色谱介质搅动预定时间长度；

t)打开所述下部室中的所述液体出口以使所述第二缓冲液流出，并监测污染物水平且弃去所述第二缓冲液；

u)如果需要，重复步骤(r)到(t)，以在所述弃去的第二缓冲液中实现污染物的预定低水平；

v)将能进一步从所述色谱介质解离所述已结合和未结合的污染物以及1％到5％的所述生物产物的第三缓冲液以足以浸没所述色谱介质的量经由所述上部室中的所述液体入口添加到所述容器中；

w)开始所述气体流动以将所述色谱介质搅动预定时间长度；

x)打开所述下部室中的所述液体出口以容许所述第三缓冲液流出；

y)监测步骤(x)中所述生物产物的浓度并弃去移除的所述第三缓冲液；

z)将能从所述色谱介质解离实质上全部的所述生物产物的第四缓冲液从所述上部室中的所述液体入口添加到所述容器中；

aa)开始所述气体流动以将所述色谱介质搅动预定时间长度；

bb)打开所述下部室中的所述液体出口以容许所述第四缓冲液流出；

cc)监测步骤(bb)中的所述生物产物的浓度并收集移除的所述第四缓冲液；

dd)重复步骤(z)到(cc)直到所收集的所述第四缓冲液中的所述生物产物达到预定低浓度；

ee)合并所述第四缓冲液的所有所收集的部分。

2.根据权利要求1所述的用于产生并纯化生物产物的方法，其中如果需要，使步骤(ee)中的所述合并的部分经受其它纯化步骤。