[发明专利]昆虫抗性和除草剂耐受性大豆事件9582.814.19.1

说明书

对相关申请的交叉引用

本申请要求2011年7月26日提交的临时申请No.61/511,664和2011年8月10日提交的临时申请No.61/521,798的优先权，这两篇通过提及完整收入本文。

发明背景

编码Cry1F和Cry1Ac synpro(Cry1Ac)的基因能够对转基因植物赋予昆虫抗性，例如对鳞翅目(lepidopteran)昆虫的抗性；而编码PAT(膦丝菌素乙酰转移酶)的基因能够对转基因植物赋予对除草剂膦丝菌素(草丁磷)的耐受性。PAT已经在大豆中成功表达，既在生成昆虫抗性转基因作物中用作选择标志物，又在转基因作物中赋予对除草剂草丁磷的商业水平的耐受性。

已知外来基因在植物中的表达受到其在植物基因组中位置影响，这可能是由于染色质结构(例如异染色质)或整合位点附近的转录调节元件(例如增强子)的接近性所致(Weising等,Ann.Rev.Genet22:421-477,1988)。同时，转基因在基因组中不同位置处的存在会以不同方式影响植物的总体表型。出于此原因，经常有必要筛选大量事件以鉴定以引入的感兴趣基因的最佳表达为特征的事件。例如，在植物中及在其它生物体中已经观察到事件间可以有引入基因的表达水平的较宽变化。还可以有表达的空间或时间方式的差异，例如转基因在各种植物组织中的相对表达差异，其不能对应于从引入的基因构建体中存在的转录调节元件预期的方式。出于此原因，常见的是生成数百至数千个不同事件，并且对那些事件筛选具有对于商业目的期望的转基因表达水平和方式的单一事件。具有期望的转基因表达水平或方式的事件可用于将转基因渐渗(introgress)入其它遗传背景中，其通过使用常规育种方法的有性异性杂交(outcrossing)进行。此类杂交的后代维持初始转化体的转基因表达特征。此策略用于确保完全适合于地方生长条件的多种品种的可靠基因表达。

期望能够检测特定事件的存在以测定有性杂交的后代是否含有转基因或感兴趣转基因的组。另外，用于检测特定事件的方法会有助于例如遵守要求自重组作物植物衍生的食物的销售前批准和标签的规则，或者有助于用于环境监测，监测田间作物的性状，或者监测自作物收获物衍生的产品，以及用于确保服从管理或合同条款的各方的顺应性。

有可能通过本领域中已知的任何核酸检测方法，包括但不限于聚合酶链式反应(PCR)或使用核酸探针的DNA杂交来检测转基因事件的存在。这些检测方法一般聚焦于常用的遗传元件，诸如启动子、终止子、标志物基因，等等，因为对于许多DNA构建体，编码区是可互换的。因此，此类方法可能不可用于区别不同事件，特别是使用相同DNA构建体或非常相似的构建体生成的那些事件，除非与插入的异源DNA相邻的侧翼DNA的DNA序列是已知的。例如，对于玉米事件DAS-59122-7，事件特异性PCR测定法记载于美国专利申请2006/0070139。会期望具有用于鉴定大豆事件9582.814.19.1的简单且有区别力的方法。

发明概述

本发明涉及新的昆虫抗性和除草剂耐受性转基因大豆转化事件，称作大豆事件9582.814.19.1，其包含插入大豆细胞基因组内的特定位点中的如本文中描述的cry1F，cry1Ac和pat。代表性大豆种子已经以段落[0021]中标识的登录号保藏于美国典型培养物保藏中心(ATCC)。含有此事件的大豆植物的DNA包含本文中描述的接合(junction)/侧翼序列，其表征大豆基因组内插入DNA的位置。SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2诊断大豆事件9582.814.19.1。更具体而言，SEQ ID NO:1的bp1400/1401，和bp1536/1537，及SEQ ID NO:2的bp152/153处接合周围的序列诊断大豆事件9582.814.19.1。下文段落[00012]描述了包含含有大豆事件9582.814.19.1的大豆DNA特征性的这些接合的序列的例子。