[发明专利]来自化脓性链球菌的内切糖苷酶及其使用方法

权利要求书

1.一种多肽，包括

(a)SEQ ID NO:1的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少50%一致性并具有内切糖苷酶活性的变体；或

(c)它们的任一个的具有内切糖苷酶活性的片段。

2.一种能够结合至IgG并且不具有内切糖苷酶活性的多肽，所述多肽包括

(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少50%一致性的变体，其中等价于第186位点的谷氨酸的氨基酸被取代；或

(c)它们的任一个的片段。

3.一种多核苷酸，包含编码权利要求1或权利要求2的多肽的序列。

4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其包括

(i)SEQ ID NO:3或其互补序列；

(ii)在严格条件下与(i)中定义的序列杂交的序列；

(iii)由遗传密码子造成与(i)或(ii)中定义的序列简并的序列；

(iv)与(i)、(ii)或(iii)中定义的序列具有至少60%一致性的序列；

(v)序列(i)、(ii)、(iii)或(iv)的任一个的片段，并且该片段编码具有内切糖苷酶活性的多肽；或

(vi)序列(i)、(ii)、(iii)、(iv)或(v)的任一个的变体，该变体包含位于编码的氨基酸的第186位点或其等价位点处的谷氨酸的取代，并且该变体编码不具有内切糖苷酶活性但能够结合至IgG的多肽。

5.一种表达载体，包含权利要求3或4中定义的多核苷酸。

6.一种水解糖蛋白的聚糖的方法，该方法包括将所述糖蛋白与权利要求1中定义的多肽一起温育。

7.一种评价糖蛋白的糖基化状态的方法，该方法包括将糖蛋白与权利要求1的多肽一起温育，并分析所产生的产物。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述方法包括：

(a)将所述糖蛋白与权利要求1的多肽接触从而水解糖蛋白的聚糖；

(b)将所述聚糖与去糖基化的蛋白质分离；

(c)分析所产生的所述聚糖和/或去糖基化的蛋白质。

9.根据权利要求6或7的任一项的方法，其中所述糖蛋白包含IgG抗体或单克隆IgG抗体。

10.一种从含IgG的样品中分离IgG的方法，所述方法包括：

(a)将所述含IgG的样品与缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS49多肽接触，从而允许形成IgG-EndoS49多肽复合物；

(b)从被接触的样品中分离所述EndoS49；

从而获得分离的IgG。

11.一种确定样品中是否存在IgG的方法，该方法包括：

(a)将所述样品与缺乏IgG内切糖苷酶活性的EndoS49多肽接触，从而允许形成IgG-EndoS49多肽复合物；

(b)任选地从被接触的样品中分离所述EndoS49；和

(c)确定被分离的EndoS49是否结合至IgG；

从而确定样品中是否存在IgG。

12.根据权利要求10或11所述的方法，其中所述EndoS49多肽包括：

(a)SEQ ID NO:2的氨基酸序列；

(b)与SEQ ID NO:2的氨基酸序列具有至少50%一致性且具有IgG结合活性的变体；或

(c)它们的任一个的具有IgG结合活性的片段。

13.根据权利要求10至12的任一项所述的方法，其中所分离或检测的IgG为其天然的、功能上有活性的形式。

14.根据权利要求10至13的任一项所述的方法，其中所分离或检测的IgG包含IgG亚类IgG₁、IgG₂、IgG₃和IgG₄的至少一个、优选两个、三个或所有四个亚类。

15.根据权利要求10至14的任一项所述的方法，其中步骤(a)额外地包括将所述样品与能够结合至EndoS49多肽的磁性纳米颗粒群接触，并且其中步骤(b)包括在被接触的样品上进行磁场分离。