[发明专利]用于重组产生藏红花化合物的方法和物质

权利要求书

1.产生类胡萝卜素的重组微生物宿主细胞，其包含：

(a)编码玉米黄素切割双加氧酶(ZCD)的外源核酸，其中所述ZCD为藏红花(Crocus sativus)ZCD；

(b)编码法夫酵母β-胡萝卜素羟化酶(CH)的外源核酸；以及

(c)编码法夫酵母牻牛儿基牻牛儿基二磷酸合酶(GGPPS)、法夫酵母八氢番茄红素β-胡萝卜素合酶和粗糙脉孢霉八氢番茄红素脱氢酶的内源基因和/或外源核酸；

其中所述宿主细胞产生可检测量的藏红花酸二醛、藏红花酸或羟基-β-环柠檬醛(HBC)中的任意一种或更多种。

2.权利要求1的宿主细胞，其中所述宿主细胞还包含编码β-胡萝卜素羟化酶(CH)或醛脱氢酶(ALD)的内源基因，或者编码ALD的外源核酸。

3.权利要求1的宿主细胞，其还包含编码糖苷配基O-糖基尿苷5’-二磷酸(UDP)糖基转移酶(O-糖基UGT)的外源核酸，其中所述糖苷配基O-糖基UGT为氨基酸序列如SEQ ID NO：10所示的UGT85C2，氨基酸序列如SEQ ID NO：12所示的UGT73-EV12，或者UGT71杂交酶，所述杂交酶选自氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示的71C125571C2和氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示的71C125571E1。

4.权利要求3的宿主细胞，其中所述宿主细胞产生可检测量的藏红花苦苷或藏红花苷。

5.权利要求4的宿主细胞，其中所产生的藏红花苦苷的一些或全部被脱葡糖基化以形成藏红花醛。

6.权利要求1的宿主细胞，所述宿主细胞还包含编码尿苷-5’-二磷酸葡萄糖(UDP-葡萄糖)-藏红花酸8，8’-葡糖基转移酶的外源核酸，其中所述UDP-葡萄糖-藏红花酸8，8’-葡糖基转移酶包括藏红花UDP-葡萄糖-藏红花酸8，8’-葡糖基转移酶，并且其中藏红花UDP-葡萄糖-藏红花酸8，8’-葡糖基转移酶是氨基酸序列如SEQ ID NO：66所示的多肽。

7.权利要求6的宿主细胞，其中所述宿主细胞产生可检测量的藏红花酸单葡糖苷、藏红花酸二葡糖苷、藏红花苷或藏红花酸酯。

8.权利要求1的宿主细胞，所述宿主细胞还包含：

(a)编码UGT76G1的外源核酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示；

(b)编码71C125571C2的外源核酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示；或者

(c)编码71C125571E1的外源核酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO：20所示。

9.权利要求7的宿主细胞，其中所述宿主细胞产生可检测量的藏红花酸龙胆二糖基酯、藏红花苷或藏红花酸单葡糖基酯和藏红花酸二葡糖基酯。

10.权利要求1的宿主细胞，其中所述宿主细胞还包含编码氨基酸序列如SEQ ID NO：29所示的UN1761的基因，或者编码氨基酸序列如SEQ ID NO：31所示的UN4522的基因。

11.权利要求1的宿主细胞，其中所述微生物为酵母或大肠杆菌(Escherichia coli)。

12.权利要求11的宿主细胞，其中所述酵母为产油酵母。

13.权利要求11的宿主细胞，其中所述微生物为酵母菌(Saccharomycete)。

14.权利要求11的宿主细胞，其中所述酵母菌是酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)。