[发明专利]后核干细胞的dsRNA/DNA杂合基因组复制中间体无效

专利信息
申请号: 201280038235.9 申请日: 2012-06-01
公开(公告)号: CN103890582A 公开(公告)日: 2014-06-25
发明(设计)人: 威廉·G·希利;艾连纳·V·寇斯特杰华;B·大卫·史多勒 申请(专利权)人: 麻省理工学院;塔夫斯大学
主分类号: G01N33/50 分类号: G01N33/50;C12Q1/68
代理公司: 北京银龙知识产权代理有限公司 11243 代理人: 钟晶;於毓桢
地址: 美国马*** 国省代码: 美国;US
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摘要:
搜索关键词: 干细胞 dsrna dna 基因组 复制 中间体
【权利要求书】:

1.一种用于鉴别后核干细胞的方法,包含以下步骤:

a)使样品中细胞的细胞核显色,其中所述样品是通过实质上保护具有最大直径长达约50微米的细胞核中的细胞核结构的完整性的方法制备的;和

b)鉴别所述样品中含有中间体dsRNA/DNA双链体基因组的细胞,

从而鉴别后核干细胞。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述后核干细胞是动物干细胞。

3.根据权利要求1或权利要求2所述的方法,进一步包含c)枚举步骤b)中所鉴别的细胞。

4.根据权利要求1所述的方法,其中所述后核干细胞是选自胎儿、幼体、成体或肿瘤干细胞。

5.根据权利要求2所述的方法,其中所述动物是哺乳动物,例如人类。

6.根据权利要求3所述的方法,其中所述样品是分离的组织活组织检查样品或细胞培养样品。

7.根据权利要求1所述的方法,其中所述显色是所述细胞与针对dsRNA/DNA双链体具有特异性的经可检测标记的抗体相接触的结果。

8.根据权利要求7所述的方法,其中所述标记是荧光标记。

9.根据权利要求1所述的方法,其中所述显色是所述细胞与区分单链与双链核酸的染料相接触的结果。

10.根据权利要求9所述的方法,其中所述染料是吖啶橙并且在显色之前用RNAse处理所述细胞。

11.根据权利要求1或9所述的方法,其中在使所述细胞核显色之前用RNAse处理所述样品。

12.根据权利要求11所述的方法,其中所述显色是所述细胞与针对ssDNA具有特异性的经可检测标记的抗体相接触的结果。

13.根据权利要求12所述的方法,其中所述标记是荧光标记。

14.根据权利要求6所述的方法,其中所述样品是来自疑似含有肿瘤、伤口愈合病变或动脉粥样硬化病变的组织的组织活组织检查样品,其中所述伤口愈合病变可以任选地是再狭窄病变。

15.一种用于鉴别调节后核干细胞的生长、迁移、复制或存活的试剂的方法,包含

a)测定样品细胞中包含中间体dsRNA/DNA双链体基因组的细胞核的存在和/或数目和/或分布,其中所述样品包含含有中间体dsRNA/DNA双链体基因组的后核干细胞并且维持与候选试剂在适于所述试剂与所述细胞核相互作用的条件下相接触,并且其中所述样品是通过实质上保护具有最大直径长达约50微米的细胞核的完整性的方法制备的;和

b)比较与所述候选试剂相接触的所述细胞中包含中间体dsRNA/DNA双链体基因组的细胞核的存在和/或数目与包含后核干细胞但不与所述候选试剂相接触的对照细胞中包含中间体dsRNA/DNA双链体基因组的细胞核的存在和/或数目,

藉此,与所述候选试剂相接触的所述细胞中包含中间体dsRNA/DNA双链体基因组的细胞核的数目和/或分布相对于不与所述候选试剂相接触的对照细胞中的所述数目和/或分布的变化指示所述试剂的有效性。

16.根据权利要求15所述的方法,其中所述细胞与所述候选试剂在培养物中相接触。

17.根据权利要求16所述的方法,其中所述细胞是动物细胞。

18.根据权利要求15所述的方法,其中所述动物细胞与所述候选试剂在体内相接触。

19.根据权利要求18所述的方法,其中所述动物细胞是哺乳动物细胞,是从异种移植实体肿瘤获得。

20.根据权利要求15所述的方法,其中所述显色是所述细胞与针对dsRNA/DNA双链体具有特异性的抗体相接触的结果。

21.根据权利要求20所述的方法,其中所述抗体经荧光标记。

22.根据权利要求15所述的方法,其中所述显色是所述细胞与区分单链与双链核酸的染料相接触的结果。

23.根据权利要求22所述的方法,其中所述染料是吖啶橙并且在显色之前用RNAse处理所述细胞。

24.根据权利要求15或22所述的方法,其中在使所述细胞核显色之前用RNAse处理所述样品。

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