[发明专利]植物转化方法

权利要求书

1.用于产生转基因植物的方法，其包括以下步骤：

a)提供损伤的可转化外植体，其包含下胚轴或其部分、至少一个子叶和选自以下的损伤组织：

i.初生叶节或更高叶节的损伤的分生组织，

ii.子叶节的损伤的分生组织，和

iii.损伤的上胚轴组织，

b)利用包含选择标记基因的至少一个植物表达盒的多核苷酸转化所述外植体所包含的细胞，

c)通过将所述外植体的下胚轴或其部分插入到生长培养基中来将所述外植体转移到所述生长培养基中，所述生长培养基包含针对所述选择标记基因的至少一种选择化合物，其中将所述外植体以向上的位置置于所述生长培养基中，

d)允许所述外植体形成枝条和／或允许该枝条伸长，所述枝条包含植物细胞，所述植物细胞包含含有所述选择标记基因的所述至少一个植物表达盒的所述多核苷酸，和

e)从所述枝条再生转基因植物。

2.权利要求1的方法，其中通过共培养所述外植体与包含T-DNA的农杆菌进行步骤b)，所述T-DNA包含含有所述选择标记基因的至少一个植物表达盒的多核苷酸。

3.权利要求1的方法，其中步骤a)中的外植体来自6-10天龄幼苗。

4.权利要求2和3的方法，其中所述共培养允许转化损伤的分生组织包含的细胞，以便获得嵌合外植体。

5.权利要求1-4任一项的方法，其中所述方法还包括的步骤b1)，即将所述外植体转移到枝条诱导培养基上，并在所述枝条诱导培养基上培养所述外植体。

6.权利要求1-4任一项的方法，其中在步骤b)后立即进行步骤c)。

7.权利要求1-6任一项的方法，其中在将所述外植体转移到生长培养基中之后，在离体条件下培养所述外植体。

8.权利要求1-7任一项的方法，其中步骤e)包括以下步骤：

e1)从外植体分离步骤d)中获得的伸长的枝条，

e2)将所分离的伸长的枝条转移到生长培养基中，和

e3)从所述伸长的枝条再生转基因植物。

9.权利要求1-7任一项的方法，其中在不从所述外植体分离伸长的枝条的情况下再生步骤e)中的转基因植物。

10.权利要求1-9任一项的方法，其中步骤c)中的所述生长培养基是水培培养基，特别是其中所述水培培养基是基于甲醛或纤维素的泡沫。

11.权利要求1-11任一项的方法，其中所述选择标记基因是突变的AHAS基因(乙酰乳酸合酶基因)，或针对D-氨基酸强加的毒性效应赋予抗性或增强的耐受性的标记基因，特别是编码D-丝氨酸脱氨酶、D-氨基酸氧化酶，或D-丙氨酸转氨酶的标记基因。

12.权利要求12的方法，其中所述选择标记基因是突变的AHAS基因，并且其中所述选择化合物是咪唑啉酮除草剂，特别是灭草烟。

13.权利要求1-13任一项的方法，其中所述植物是双子叶植物，优选其中所述植物的属选自大豆属、苜蓿属和菜豆属，更优选其中所述植物是大豆。

14.用于产生转基因植物的方法，其包括以下步骤：

(i)提供损伤的可转化外植体，其包含至少一个子叶，和初生叶节或更高叶节的损伤的分生组织(特别是初生叶节或更高叶节的损伤的腋生分生组织)，

(ii)利用包含选择标记基因的至少一个植物表达盒的多核苷酸转化所述外植体所包含的细胞，

(iii)将所述外植体转移到枝条诱导培养基中，并在所述枝条诱导培养基上培养所述外植体，所述枝条诱导培养基包含针对所述选择标记基因的至少一种选择化合物，由此允许包含植物细胞的至少一个从头形成的枝条的形成，所述植物细胞包含所述选择标记基因的所述至少一个植物表达盒，

(iv)分离包含所述至少一个从头形成的枝条的所述初生叶节或更高叶节的分生组织，并将所述分生组织区转移到水培培养基上，所述水培培养基包含针对所述选择标记基因的至少一种选择化合物，并允许所述至少一个从头形成的枝条伸长，和

(v)从所述如此来源的小植株再生转基因植物。

15.通过权利要求9的方法获得的植物，特别是通过权利要求9的方法获得的已经开花的植物。