[发明专利]中胚层谱系祖细胞

说明书

技术领域

本发明涉及中胚层谱系的祖细胞及其在治疗中的应用。

背景技术

间充质干细胞(MSC)是多能的成体干细胞。MSC分化形成见于骨骼组织中的不同的特化细胞。例如，它们能分化为软骨的细胞(软骨细胞(chondrocyte))、骨细胞(成骨细胞)和脂肪的细胞(脂肪细胞(adipocyte))。

MSC用于多种疗法中，例如对年龄相关性黄斑变性(AMD)和心肌梗塞的治疗。一旦被施用至患者，MSC通常会迁移(或归巢)至受损的组织处并通过旁分泌信号传导以及通过促进受损组织中的相邻细胞的存活、修复和再生而发挥其治疗效果。

目前的疗法通常涉及MSC亚型混合物的输注，而这些亚型中的某些并不能高效地迁移至所关注的组织。这使得需要使用高的细胞剂量，而这可能导致离靶(off-target)副作用和体积相关的副作用。MSC通常获自骨髓，因此其难以大量获得。

发明内容

本发明人令人惊讶地鉴定出了一类新的具有特定标志物表达谱的中胚层谱系祖细胞(PML)。本发明的PML的同源群能从单个核细胞(MC)(例如外周血MC)中分离出。所述PML能够高效地迁移至受损组织并对其进行修复。

本发明提供了一种中胚层谱系祖细胞，其中，所述细胞(a)表达可检测水平的CD29、CD44、CD73、CD90、CD105和CD271并且(b)不表达可检测水平的CD14、CD34和CD45。

本发明还提供了：

-包含两种以上的本发明的祖细胞的群；

-一种药物组合物，其包含(a)本发明的祖细胞或本发明的群以及(b)药物可接受的载剂或稀释剂；

-一种制备本发明的群的方法，其包括：(a)在诱导单个核细胞(MC)分化为中胚层谱系祖细胞的条件下培养MC；和(b)收集具有本发明的表达谱的祖细胞并进行培养，由此制备本发明的群；

-一种修复患者的受损组织的方法，其包括对患者施用本发明的群并由此修复患者的受损组织，其中所述群包含治疗有效数量的细胞；和

-用于修复患者的受损组织的本发明的群。

附图说明

图1显示了RT-PCR凝胶，其证实了本发明的PML中存在CD44而不存在CD34。

图2显示了对本发明的PML的FACS分析的结果。这证实了所述细胞至少呈CD73和CD90阳性，而对CD14、CD34和CD45呈阴性。

图3显示了来自FACS分析的进一步结果，即针对CD90(上图)和CD73(下图)的柱形图。

图4显示了在染色的细胞(图4a)和未染色的细胞(图4b)中缺乏CD14、CD34和CD45的FACS柱形图。

图5显示了中胚层谱系祖细胞以时间依赖性和CXCR4依赖性方式迁移至骨折部位。在接受了PML-P-Act-Luc(PML)(左列)、PML-fl-Act-Luc-CXCR4+(CXCR4(+))(中列)或PML-P-Act-Luc-CXCR4-(CXCR4(-))(右列)移植物的胫骨骨折的小鼠骨折/移植后的第1天(第1行)、第3天(第2行)、第7天(第3行)和第14天(第4行)进行生物发光分析。

具体实施方式

应该理解，针对本领域的具体需要，可以对所公开的产品和方法的不同应用进行定制。此外还应理解，本文所用的术语的目的仅在于描述本发明的特定实施方式，而非意在进行限制。

另外，除非文中明确地另有规定，本说明书和所附权利要求书中所用的单数形式“一个”、“一种”和“所述”都包括复数的指代物。因此，例如，对于“一个细胞”的指代包括“多个细胞”，对于“一种组织”的指代包括两种以上的组织，对于“一位患者”的指代包括两位以上的患者，等等。

本文中所引用的所有出版物、专利和专利申请，不论在上文还是下文中，均通过援引将其全部内容并入本文中。

本发明的PML

本发明提供了一种中胚层谱系祖细胞(PML)。所述PML表达可检测水平的CD29,CD44,CD73,CD90,CD105和CD271，但不表达可检测水平的CD14,CD34和CD45。

本发明的PML具有许多优点。在此将总结其主要优点。然而，根据下文的讨论，其它优点将变得显而易见。