[发明专利]特异性结合胰岛素样生长因子1的抗体

说明书

发明背景

人胰岛素样生长因子1(UniProtKB条目P05019，IGF1_人，(SEQ ID NO:1))，也称为生长调节素C和生长调节素A，处于其成熟形式，即一种70个aa的多肽(SEQ ID NO:2)，其与IGF-2和胰岛素共享大段的序列同一性和高结构同源性(Rinderknecht,E.和Humbel,R.E.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA73(1976)2365-2369;Rinderknecht,E.和Humbel,R.E.,J.Biological Chemistry253(1978)2769-2776)。人IGF-2以IGF-1的500倍摩尔过量存在于人血清中(Jones,J.I.和Clemmons,D.R.,Endocr.Rev.16(1995)3-34)。IGF-2的较高血清浓度及其与IGF-1的序列同源性是对IGF-1特异性免疫检测的主要障碍。因此，生成清楚地在IGF-1和IGF-2之间进行区分的IGF-1特异性抗体(即没有与IGF-2的交叉反应性的抗体)是具有挑战性的，而且将构成对体液样品中IGF-1的特异性检测的基石。

与胰岛素类似，IGF-1多肽链可分成域。IGF-1包含4个域，分别为B(氨基酸残基1-29)、C(30-41)、A(42-62)和D(63-70)。域A和B分别是胰岛素B和A链的结构同源物，域C与胰岛素原的连接肽类似，而D域在胰岛素中没有对应物。

如Manes S.等,J.Endocrinol.154(1997)293-302总结的，认为IGF-1介导生长激素(GH)的促生长活性(Sara,V.R.和Hall,K.,Physiol Rev.70(1990)591-614)。在多种细胞类型中经由旁分泌或自分泌途径对细胞生长、分化和存活的局部控制中，它也被视为是关键的(Jones J.I.和Clemmons,D.R.,Endocrin.Rev.16(1995)3-34)。已提出IGF-1的假定受体，即1型IGF受体(IGF-1R)(Ullrich,A.等,EMBO J.,5(1986)2503-2512)在肿瘤发生中起着关键作用(Sell,C.等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90(1993)11217-11221)。有足够证据指示许多肿瘤表达IGF-1R，且生成并向胞外环境分泌IGF-1或IGF-2(Baserga,R.,Cell79(1994)927-930;Werner,H.等,Int.J.Biochem.Cell Biol.27(1995)987-994)，由此以自分泌方式促进连续细胞生长。

IGF-1和IGF-I2均在大量组织和细胞类型中表达且可具有自分泌、旁分泌和内分泌功能。成熟的IGF-1和IGF-2在人、牛和猪蛋白之间高度保守(100%同一性)，且还展现出跨物种活性。IGFL(胰岛素样生长因子样)家族包括在人中的4种小的(约11kDa)、可能分泌的家族成员和小鼠中的1种。

鉴于IGF-1的重要作用，生成IGF-1特异性的抗体，即没有与IGF-2的交叉反应性的抗体，对于IGF-1的特异性检测既是挑战性的也是极为重要的。尽管事实上已知胰岛素样生长因子达超过30年，但迄今为止乃至今天在体液样品中特异性检测IGF-1或在组织样品中定位蛋白质胰岛素样生长因子1仍然是困难的。这可能是例如由于本领域已知抗体的不充足的结合亲和力和/或对相关分子的不同水平交叉反应性所致。